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目的：通过构建pACYC184-X质粒评价系统，研究阻遏子AmpD对DHA-1型质粒AmpCβ-内酰胺酶诱导表达调控的作用。方法：以我院收集的10株产DHA-1型质粒AmpC酶肺炎克雷伯菌为研究对象，分别设计特异性引物，PCR方法扩增实验菌株质粒ampCR(ampC+ampR)基因及染色体ampD基因，将PCR产物克隆到pGEM-TEasy载体质粒中测序，以检测DHA-1型质粒AmpC酶ampCR基因及ampD基因的产生情况。选取Kp1及Kp17实验菌株为研究对象，分别克隆ampCR基因到pACYC184载体上，构建pACYC184-ampCR重组质粒，转化到E.coli DH5α(ampCR-，ampD+)中，用以评价ampD+、ampCR-菌株中引入外源性ampCR基因时，重组子E-ampCR的AmpC酶产生情况；克隆ampD基因到pACYC184载体上，构建pACYC184-ampD重组质粒，转化至E-Cloacae029M(ampCR+，ampD-)持续高表达AmpC酶宿主菌中，用以评价ampD-，ampCR+菌株中引入外源性ampD+基因时，重组子Ea-ampD的AmpC酶诱导产生情况。根据诱导耐药表型及头孢西丁MIC值的变化评价pACYC184-ampCR和pACYC184-ampD重组质粒对宿主菌AmpC酶诱导产生情况的影响。结果：全部实验菌株PCR均扩增出2767bp的ampCR片段和622bp的ampD片段。与摩根摩根菌(Genbank AF055067)比对，ampR基因中，发生一个氨基酸改变(Thr114→Ala)的有9株；两个氨基酸位点突变(Thr114→Ala、Val72→Ala)有一株Kp17。ampD基因与敏感菌株KpS比对，有5株有1个突变位点(Leu143→Ile)，其他菌株无突变。重组子E-ampCR均表现为AmpC酶可诱导表型，头孢西丁MIC值由16μg/ml升高到128μg/ml。重组子Ea-ampD均恢复AmpC酶可诱导表型，头孢西丁MIC值由>1024μg/ml降低到256μg/ml。结论：AmpD参与DHA-1型质粒AmpCβ-内酰胺酶的诱导表达，并与ampR因子共同作用；质粒介导的AmpC酶耐药基因复杂，有多种因子参与。