论文部分内容阅读
目的：探讨扇贝裙边提取物（ESS）抗动脉粥样硬化（AS）作用，研究其多糖成分--糖胺聚糖（SS-GAG）对脂质过氧化物及自由基损伤血管内皮细胞的形态及合成和分泌功能的影响。 方法：1、用体外培养的人脐静脉内皮细胞株（HUVEC，CRL-2480），建立氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）诱导的血管内皮细胞损伤模型，应用MTT方法观察分析SS-GAG对血管内皮细胞氧化损伤后的增殖活性抑制的影响。 2、采用过氧化氢（H2O2）造成血管内皮细胞体外氧化损伤的模型，用MTT方法观察SS-GAG对过氧化氢（H2O2）引发的血管内皮细胞氧化损伤的增殖活性抑制的影响。 3、用黄嘌呤氧化酶法测定血管内皮细胞内超氧化物歧化酶（SOD）的活性，分析SS-GAG对OX-LDL诱导的血管内皮细胞氧化损伤后细胞的SOD活性的影响；通过硫代巴比妥酸反应物（TBARS）方法测定血管内皮细胞内脂质过氧化损伤的代表性代谢产物丙二醛（MDA）的含量，分析SS-GAG对OX-LDL造成的血管内皮细胞脂质过氧化损伤后细胞的丙二醛（MDA）含量的影响。 4、建立OX-LDL诱导的血管内皮细胞氧化损伤模型，用硝酸还原酶法测定SS-GAG对血管内皮细胞的血管依赖性舒张因子／一氧化氮（EDRF／NO）含量的影响；用化学比色法测定分析SS-GAG对血管内皮细胞内的内皮型一氧化氮合成酶（eNOS）活性的影响。 5、利用OX-LDL所致的血管内皮细胞氧化损伤模型，用放射免疫法测定血管内皮细胞合成分泌的前列环素I2（PG I2）的稳定性代谢产物6-酮-前列腺素F1a(PGF1a)和血栓素A2（TXA2）的稳定性代谢产物血栓素B2（TXB2）的含量，分析SS-GAG对血管内皮细胞氧化损伤后的合成分泌功能的影响。 结果：1、OX-LDL损伤的模型组血管内皮细胞与正常对照组血管内皮细胞比较，细胞数量显著减少，MTT染色吸光度（OD值）明显下降中文摘要(P（0.01）;而用55一GAG（终浓度为50林g/ml一1600件g/ml）预处理的各保护组血管内皮细胞的细胞数量、MTT染色吸光度（0D值）均较模型组细胞明显增加（P<0.01）;高剂量（终浓度为200林g/ml1600林g/ml）55一GAG保护组血管内皮细胞的增殖活性明显高于低剂量（终浓度为50吨/m1）保护组的血管内皮细胞的增殖活性（P<0 .05）;甚至有的55一GAG保护组（终浓度为400林g/m1一1600拼g/ml）细胞增殖活性超过正常对照组细胞的增殖活性（P<0.05）;55一GAG对照组血管内皮细胞数量、MTT染色吸光度（OD值）与正常对照组细胞比较也明显增加（P<0.01）。 2、HZOZ损伤的模型组血管内皮细胞与正常对照组内皮细胞比较，增殖活性明显下降（P<0.01）;而经55一GAG（终浓度分别为50吨/m1，100陀/m1，20郎g/m1）预处理后，血管内皮细胞的损伤明显减轻，细胞增殖活性较模型组细胞明显增加（P<0，01）。 3、与正常对照组血管内皮细胞比较，经OX一LDL损伤的模型组内皮细胞内的SOD活性明显减弱，MDA含量明显增加（P<0 .01）;而经55一GAG（终浓度分别为50吨/m1，100魄/m1，200陀/m1）预处理的各保护组血管内皮细胞与模型组内皮细胞相比，细胞内SOD活性明显增强，MDA含量明显减少(P（0.01）。 4、用55一GAG（终浓度分别为50协g/ml，1 00卜g/ml，200林g/ml）预处理的各保护组血管内皮细胞虽然同样受到OX一LDL损伤，但与模型组内皮细胞比较，其细胞内的NO含量明显增加，eNOS活性明显增强（P<0 .01）;经OX一LDL损伤的模型组血管内皮细胞与正常对照组内皮细胞比较，其内皮细胞内的NO含量明显减少，eNOS活性明显降低（P<0 .01）。 5、经OX一LDL损伤的模型组血管内皮细胞与正常对照组内皮细胞比较，细胞培养液中的PGFI。水平明显减少，TXBZ水平明显增加（P<0 .01）;经55一GAG（终浓度分别为100魄/m1，200陀/m1）预处理的各保护组血管内皮细胞培养液中的PGF;。水平明显增加，TXBZ水平明显减少（P<0.01）。 结论:55一GAG不仅可减轻OX一LDL和HZOZ氧化损伤造成的血管内皮细胞增殖活性的抑制，而且还能促进正常血管内皮细胞的增殖;不但能降低脂质过氧化损伤造成的细胞内脂质过氧化毒性代谢产物丙二醛（MDA）的产生和血栓素AZ（TXAZ）水平的升高，而且能有效拮抗OX一LDL所致的血管内皮依赖性血管舒张因子一氧化氮（NO）和前列腺素工2（PGIZ）水平的下降，增加血管内皮细胞内的超氧化物歧化酶（SOD）和内皮型一氧化氮合成酶（eNOS）的活性。 综合分析本次实验结果，表明55一GAG对血管内皮细胞损伤有良好的保护作用。其保护作用机理可能与55一GAG稳定血管内皮细胞的细胞膜、抗脂质过氧化物和氧自由基对血管内皮细胞的氧化损伤作用、增加血管内 中文摘要皮细胞的内皮型一氧化氮合成酶和前列腺素或前列环素合成酶的活性有密切关系。这为动脉粥样硬化的防治提供了新的理论和实验依据。