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Hsp70基因是机体受到环境高温等应激时迅速产生大量热应激蛋白的诱导型表达基因,在生物机体的耐热性能中发挥着主要的作用。
本研究利用克隆测序技术对鸡Hsp70基因的2591bp序列进行多态性筛查,选取10个鸡品种共获得102条序列,发现36处变异,包括34个SNP和2个插入/缺失突变,其中6处变异发生在5’侧翼区;24处位于编码区;6处位于3’非编码区。编码区的24个SNP中有7个SNP可导致氨基酸的改变。34个SNP中30个为转换,4个为颠换。Hsp70基因发现的变异超过禽类SNPs平均密度的1倍以上。生物信息学分析表明,在Hsp70基因全序列的36个变异中,有7个变异位点引起转录调控结合位点的消失或改变。这些位点的突变可能对鸡Hsp70基因表达有一定的影响。
在获得的102条序列中共确定57种单倍型,其中43种为各个鸡品种的特有单倍型,14种为共享单倍型。Hsp70基因全序列的核苷酸多样性较低,但单倍型多样度高,编码区内的变异是导致个体单倍型多态性较高的一个直接原因。各个品种的变异都属于中性突变,Hsp70基因DNA序列在品种内的变异大于品种间的变异,且品种间出现了极显著的遗传分化。
本研究选取灵山鸡和隐性白洛克鸡两个鸡品种,分别测定了其在热应激条件下以及适温条件下隐性白洛克鸡的若干生理和免疫性状,以此评定其耐热性,对所测得的相关性状指标进行分析,结果表明:热应激状态下,隐性白洛克鸡的血清皮质酮水平极显著高于灵山鸡(P<0.01),H/L显著低于灵山鸡(P<0.05);而热应激处理后,隐性白洛克鸡的T3和皮质酮极显著高于非热应激状态(P<0.01),CD3+极显著低于非热应激状态(P<0.01)。这说明两个不同鸡品种的耐热性存在明显差异。
选取鸡Hsp70基因中A—69G、C+276G、C+909A和T+1476C4个SNP位点,利用PCR—RFLP方法分析了各位点不同基因型在灵山鸡和隐性白洛克鸡群体中的多态分布,发现有3个SNP(A—69G、C+909A和T+1476C)的不同基因型在灵山鸡和隐性白洛克鸡中的分布频率存在极显著差异(P<0.01)。进一步对4个位点和部分位点构建的单倍型与耐热性状进行关联分析,结果表明:在非热应激状态下的隐性白洛克鸡群体中,位点A—69G和T+1476C与CD4+/CD8+显著相关(P<0.05),位点A—69G与H/L、T+1476C与T3有一定的相关趋势。由位点A—69G、C+276G与C+909A构成的单倍型块与CD4+/CD8+呈极显著相关(P<0.01),进一步揭示A—69G可能是与CD4+/CD8+相关的遗传标记。