尖叶假龙胆化学成分及抗心肌缺血作用研究

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缺血性心脏病(又称冠心病,CAD)以其高发病率、高死亡率已成为危害人类健康和生活质量的严重疾病之一。但治疗CAD过程中造成的心肌缺血/再灌注(I/R)损伤已经成为临床治疗心肌缺血的一大障碍,因此缺血性心脏病的治疗应充分考虑缺血/再灌注损伤,寻找对二者都有效的药物对治疗CAD与其预后具有重要的临床意义。尖叶假龙胆(Gentianella acuta)为龙胆科假龙胆属一年生草本植物,具有清热利胆、退黄之功效。鄂伦春族猎民长期用其治疗心律失常和冠心病,但对其相关的化学成分与药理学报道较少,为了充分开发利用这一药用资源,本文对尖叶假龙胆的化学成分及抗心肌缺血与抗I/R损伤的药理作用进行了系统的研究。本文对尖叶假龙胆乙醇总提取物的大孔树脂色谱90%乙醇洗脱组分(GAHN)的化学成分进行了提取分离和结构鉴定。使用硅胶、Sephadex LH-20、ODS等柱色谱与制备型HPLC等分离手段,从中分离得到7个化合物。根据它们的波谱数据,鉴定了其化学结构,其中5个(?)酮类化合物为:去甲雏菊叶龙胆酮(1)、芒果苷(2)、雏菊叶龙胆酮(3)、当药醇苷(6)、去甲当药醇苷(7);2个黄酮类化合物为:异牡荆苷(4)、异荭草素(5)。其中化合物4为首次从该植物中分离得到。采用H202诱导H9c2心肌细胞氧化损伤模型,研究了GAHN对H202诱导H9c2心肌细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制。结果表明:GAHN对H202诱导H9c2心肌细胞损伤具有显著地保护作用,预孵育24小时保护作用最为显著,预孵育GAHN能够显著降低心肌细胞LDH的漏出量和细胞内MDA的含量,显著地提高细胞内抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px的活性。采用DPPH法、BTS法、邻苯三酚自氧化法、邻二氮菲法四种方法对GAHN进行了体外抗氧化活性研究,探讨了其对DPPH自由基、ABTS自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基的清除作用。结果表明:GAHN具有显著的体外抗氧化能力,其对DPPH、ABTS+、O2’-、OH的清除IC50值分别为:22.5、9.5、18.7、329mg/L。采用大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤模型,探讨了GAHN对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的保护作用及其作用机制。结果表明:与模型组相比,GAHN不同剂量组(200.0、400.0 mg/kg)可显著提升再灌注后的心脏动力学指标(RPP、±p/dtmax)的恢复率;减少再灌注后灌流液中LDH、CK-MB的释放和心室肌组织中MDA的产生;增强心室肌组织中SOD、GSH-Px、CAT的活性;增强心肌组织线粒体中ATP的含量与参与三羧酸循环酶(SDH、MDH)的活性;降低由缺血/再灌注造成的心肌组织水肿、变性程度。GAHN具有抗心肌I/R损伤的作用。采用异丙肾上腺素诱导的心肌缺血小鼠常压耐缺氧模型,考察了尖叶假龙胆总提物与总提物大孔树脂各洗脱组分(水洗脱组分、30%乙醇洗脱组分、60%乙醇洗脱组分、90%乙醇洗脱组分)对异丙肾上腺素诱导心肌缺血小鼠在常压缺氧条件下存活时间的影响。结果表明:尖叶假龙胆总提物(GAH)与30%乙醇洗脱组分(GAHT)可显著地延长小鼠的存活时间。本研究初步阐明了尖叶假龙胆抗心肌缺血的物质基础;为研制出具有自主知识产权的抗心肌缺血的新制剂提供了不可或缺的科学依据;为综合利用开发该药用资源和保障人民群众安全用药提供了实验依据。
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