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背景和目的:我们课题组既往的研究发现胰腺神经内分泌肿瘤(pancreatic neuroendocrine tumors,PNETs)频繁发生染色体1q31-32区域的杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH),该区域内存在PHLDA3基因,日本学者发现在小鼠PHLDA3基因敲除模型中有胰岛增生。因此,本课题的研究目的是:PHLDA3基因敲除能否导致大鼠PNETs发生,人类PNETs中是否在PHLDA3基因异常和表达缺失,从而阐明散发性PNETs发生的分子机制。同时明确该基因蛋白表达是否具有判断预后的价值。方法:利用免疫组化的方法测定222例PNETs组织和109例PNETs瘤旁组织中PHLDA3蛋白的表达,然后分析蛋白表达与患者的临床病理特征和预后的关系。利用甲基化特异性PCR测定PHLDA3基因启动子甲基化状态。利用微卫星标记检测PHLDA3基因是否存在LOH。采用CRISPR/Cas9技术构建PHLDA3基因敲除的SD大鼠模型,繁殖并进行基因型鉴定,分别在6月、12月、18月时处死大鼠,观察是否有肿瘤形成;取得胰腺等腺体组织,石蜡包埋后切片、HE染色,分析基因敲除大鼠和野生大鼠胰岛数量和面积的变化;留取空腹血清,测定血糖、胰岛素水平,分析PHLDA3基因敲除对糖代谢影响。结果:PHLDA3在未发生转移的PNETs中表达率较高(28.5%vs.17.9%,P =0.078),PHLDA3蛋白阳性表达的PNETs患者的预后较好(总生存:N = 187,P =0.026;无病生存:N = 187,P = 0.024),生存时间较长(总生存:N = 187,Log Rank P = 0.017;无病生存:N = 182,Log Rank P = 0.041)。PNETs及其瘤旁组织中存在高比例的PHLDA3基因启动子甲基化(分别为12/19和3/6),统计结果显示甲基化与蛋白表达无关。25.7%的PNETs存在PHLDA3基因LOH,发生LOH的肿瘤中PHLDA3蛋白表达率低(21%vs.52%,P = 0.098)。PHLDA3基因敲除的大鼠可形成PNETs,PHLDA3基因敲除大鼠的胰岛形态和大小与野生型大鼠差别不大,然而基因敲除的雄性大鼠血糖水平较低(6.23 mmol/Lvs.11.07 mmol/L,P = 0.018)。结论:敲除PHLDA3基因的SD大鼠发生PNET,而基因野生型的对照大鼠则无PNETs生成。提示PHLDA3基因是PNETs的抑癌基因。人类PNETs中存在PHLDA3基因的杂合性缺失和基因启动子甲基化,同时瘤组织中PHLDA3蛋白表达减少或丢失。提示部分人类PNETs的发生和PHLDA3基因失活相关。背景和目的:胰腺神经内分泌肿瘤(pancreatic neuroendocrine tumors,PNETs)是一组少见的异质性的肿瘤,年发病率约0.94-1.27/10万人,但是其发病率呈逐年上升趋势。我国的学者首次报道了 30%的胰岛素瘤中存在YY1T372R热点突变,然而该基因突变与蛋白表达在胰岛素瘤中的临床意义尚不明确,特别是该基因突变在其他PNETs亚型中是否发生未见报道。方法:我们在138例PNETs中对YY1基因热点突变进行一代测序,其中包括75例胰岛素瘤,19例功能性非胰岛素瘤PNETs和44例无功能PNETs。用免疫组化染色测定103个PNETs和29例配对瘤旁组织中YY1蛋白表达,用western bolt对4例PNETs、1例配对瘤旁胰腺组织和3例正常胰腺组织验证YY1蛋白表达。统计分析YY1突变和蛋白表达的临床病理意义。结果:测序结果显示19%(14/75)的胰岛素瘤和1.5%(1/67)的非胰岛素瘤PNETs存在YY1T372R突变,表明YY1基因热点突变为胰岛素瘤所特有(P = 0.001)。发生YY1T372R突变的患者年龄较大(57.5岁vs.43岁,P = 0.006)。Y1T372R突变与胰岛素瘤的良恶性以及肿瘤分期、分级均无关,提示该突变是肿瘤发生的早期事件。我们的研究还发现出现YY1T372R突变的患者胰岛素水平较低和胰岛素释放指数下调(N =69,P = 0.015和N = 69,P = 0.073);此外,O型血的胰岛素瘤患者发生YY1热点突变的比例明显高于其他血型患者(38.9%vs.13.2%,P = 0.018)。YY1T372R突变不影响蛋白表达。YY1蛋白广泛表达于PNETs和瘤旁胰腺组织的胞核中,但是同瘤旁组织相比,PNETs中YY1的表达显著上调。YY1蛋白在男性患者中的表达较高(88.1%vs.72.1%,P=0.052),在良性 PNETs 中表达较高(82.7%vs.63.6%,P=0.053),YY1高表达的患者体重指数较低(27.9 vs.29.3,P = 0.010),Kaplan-Meier生存分析显示YY1高表达的患者总生存和无病生存的时间均延长(总生存:N=71,Log Rank P =0.006;无病生存:N=68,Log Rank P =0.009),Cox模型显示YY1表达上调的患者预后好(总生存:HR15.643,95%CI1.635-149.685,P =0.017;无病生存:HR3.162,95%C10.830-12.047,P =0.092)。结论:YY1T372R热点突变在胰岛素瘤中特异存在,O型血的胰岛素瘤患者中较为多见。该突变可能是肿瘤发生的早期事件,可能影响胰岛素的分泌。YY1T372R突变不影响蛋白表达。YY1在PNETs中表达上调提示患者预后较好。