临床上经常遇到因肿瘤切除、创伤等原因造成的周围神经缺损问题，如缺损距离较短时，通过解剖游离，可以做到无张力缝合，当缺损距离过大时，通常需要进行自体神经移植。自体神经移植，无论切取哪个部位的神经都将造成额外的供区神经功能的丧失和遗留手术疤痕，而且可以选择的神经供体实在有限。为解决自体神经移植替代物，学者们进行了长时间的探索，迄今尚没有一种神经替代物能够有效地取代自体神经移植进行长距离神经缺损的修复。近年来，组织工程技术的发展为人们提出了一条构建周围神经再生的微环境和制造神经移植替代物的新思路。本研究旨在构建一种组织工程材料，同时包含两种神经再生时不可缺少的元素——雪旺细胞(SC细胞)和基底膜(BM)，为周围神经的再生提供良好的再生环境。本研究从支架材料——ZQ膜研发、初步检测、种子细胞的体外培养及与支架材料复合，直到材料塑形、植人体内修复大鼠坐骨神经缺损，进行了比较系统的研究，并对成人SC细胞的体外培养做了初步尝试，希望能为周围神经缺损的桥接修复提供一种可行的选择。 1．ZQ膜的制备 选取健康的适龄产妇，取产后的副产品——羊膜通过一系列处理，去除羊膜上皮，保留其固有层和BM，并通过反复冻融和γ射线处理，尽量去除其抗原性，保留其固有的生化组分和构型，制备成为一种菲薄的膜状可降解的生物衍生材料，作为日后研究用支架材料。初步检测表明：ZQ膜色白、半透明、质地柔软，由胶原纤维交错编织而成，全层无细胞，有些部位表面可见基底膜存留，是一种表面光滑而又具有特殊超微结构的羊膜衍生物材料。其厚度为5～10μm，纤维间隙为20～40nm，具有可操作强度。该膜极薄和半通透性的特点使之有可能用来作为多种组织的组织工程支架材料和细胞培养的底物。 2．ZQ膜生物相容性的初步研究 将MyoD基因转染的NIH 3T3成纤维细胞接种于ZQ膜上培养，倒置显微镜下观察细胞在膜上的贴附、伸展、增殖情况。接种24h后，见细胞贴壁、伸展形态与塑料培养皿上接种的细胞形态相同，生长良好、增殖活跃，并有向膜内侵入的倾向。电镜下见细胞与ZQ膜结合紧密，无间隙。ZQ膜上的细胞表现出肌丝、肌管结构。表明MyoD基因转染的成纤维细胞向肌细胞转化。另一方 第四军医大学博土学位论文 iHIHB）l，ZQ膜的te，甚ffilha。 将ZQ膜卷成卷埋置于SD大鼠皮下 内，形成极薄的纤维包裹，蛐渊 口愈合映，周围组织反应轻微；组织切片未见炎绷颐畔伯黝哪姻认，在3W 内无明显吸收和强度减低。叼磷内的腔隙依然保留，说明q膜具有舰的 生物相容性，可以作为组织区眉皮架，植人动物体内。 3．成年SD大鼠SC细胞体夕除的实硼 tqL切断成年SD大鼠的坐骨神pM，切取周围狈怀枪卦际 本，采用胶原酶与胰酶复剖e化法，加人bFG作为细胞促分裂剂，并反复进行 8化、差柏驷战铂狈粥碰佰孵育，将分离的SC纫涵敝讨树博湃，并通过 S－11免疫芽m拖硼，表明可以获得纯度达到95％以上的、可以传代的肚细胞。 istyd淑，与hyf－m－－wxxxx－m明liE＋同。M！IY’法检测第2代培养细胞生 长请况发现，其倍增时间为3d。结论是成年大鼠的SC Nldg＃Hgul－行 的；神经变性预处理可以提高成功率；培养前的组织吻切不可过细，避免造成 大量细胞损伤死亡；差掇由容绑聊绷酷瑚隋可WSCIllljlf4的纯度。 4．ZQ趾复合肚 的实验研究 鸩叼矽怖琳弗养的成年SD大鼠SC细胞接种于ZQ膜上进行培养，朋光 镜及SEM和TEM观察，发现SC细胞接种培养于ZQ IIgI4长良好，并且赃 ZQllR：i］：jtfii－n＊长，于膜发生紧密结合，甚至融合。细胞与膜界面可以－ 样结构、类半桥粒样结构等功能性的连接方式，SC细胞在ZQ膜上具有分泌和 B，并贝至临辙粥奖淋雕成。SC细胞在贝一出一长，细 胞司蛤紧密，可见基底膜样结构和细胞膜融合腑点。TEM见SC MW 表面有少填细小的疣状突起，纤长的细胞突起末端呈现翼状和鸭脚噗样扁平膨 大，膨大的突起使相邻的Me，表现出SC删…，聊 放可砌扦孕生神经的延展是十分重要的。御叼哪SC删澜一 楚，佳店刍自一战明确的，即贝哪与SC细胞具有铡的亲和性，SC细胞 在ZQ膜上表现出朗撇帧民叼膜卷内存在的腔隙和良妇9贿眩的SC 细胞可s绘为神经角咀拄熟共有利的环境，勋SC纫沮刨拘q酵凭司菩可g脯拢 ④——。 5．复合 SC细胞的 ZQ膜卷修复神经缺损的实验研究 自制的ZQ膜复台付中k芳养的自体SC细胞后 制备成凭钧九吊于桥拄雏豺自戍 3