本氏烟NbRDR1m天然突变体原型NbRDR1在病毒防御中的功能研究

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植物体内依赖于RNA的RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase,RDRs)可介导RNA沉默信号的放大,在植物病毒防御反应中起着至关重要的作用。与烟草属中其他种类的相比,本氏烟(Nicotiana benthamiana)对病毒侵染表现出超敏感,通常会表现出更为严重的病毒症状。有研究表明本氏烟NbRDR1m(Nicotiana benthamiana RNA dependent RNA polymerase1mutant)编码区的开放阅读框架内有一段72个碱基的插入片段,该插入片段造成开放阅读框架的提前终止而不能得到全长且有功能的NbRDR1蛋白可能是造成其对病毒侵染超敏感的主要原因。但该猜测并未得到证实。为了确证这一猜测,我们首先通过融合PCR技术去除NbRDR1m中72个插入碱基,将NbRDR1m恢复至NbRDR1的原型。然后将该原型NbRDR1构建双元载体并转化至野生型本氏烟中创制过表达NbRDR1的转基因株系。通过抗生素筛选和基因组PCR,鉴定出转基因株系并采用半定量RT-PCR分析各转基因株系NbRDR1的表达情况。随机挑选2个表达量较高和一个表达量较低的转基因株系用与GFP融合的烟草属病毒烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV-GFP),及非烟草属病毒芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV-GFP)和马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX-GFP)进行病毒侵染实验,比较其与野生型及空载体对照株对这三种病毒的抗性差异。我们的实验结果表明,过表达NbRDR1的转基因株系对三种病毒的抗性均有较明显增强。具体表现在三种病毒在过表达株系中的系统侵染明显受到抑制及病毒症状显著降低。以上证据表明:本氏烟中的天然突变体原型NbRDR1在抗病毒防御反应中起着一定作用,证实了本氏烟对病毒超敏感与NbRDR1m之间的内在关联,即72碱基的插入导致NbRDR1m功能丧失是本氏烟对病毒超敏感的主要原因之一。
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