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辽宁绒山羊是一种遗传力稳定以羊绒而闻名的品种,随着羊绒大量的流行,人们对羊绒的需求越来越高。虽然羊绒产量很高,但总体趋势是羊绒过粗,而羊绒细度起着决定性作用,是评价羊绒品质的重要指标之一。近些年,通过高通量测序和全基因组关联分析等方法已经在调控羊绒细度方面有新的进展,发现了调控羊绒细度的关键基因和关键通路,但仍未能从根本上解决调控羊绒细度这一课题。本研究从分子生物学角度出发,拟筛选出可能调控羊绒细度的关键基因和分析相关机制,构建关键基因KRT26的ce RNA调控网络并做表达验证,以及对羊绒细度功能基因与产绒性能的相关性分析。获得的结果如下:1.辽宁绒山羊皮肤组织miRNA分离和表达验证本研究通过对辽宁绒山羊(LCG)的皮肤进行高通量测序,得到14801303的干净读数,其中包括464个已知的miRNAs和45个novel miRNAs。靶基因富集分析显示,miRNA靶基因在KEGG途径中大量富集,这些途径,包括孕酮卵母细胞成熟,细胞内吞作用,PI3K-Akt信号传导途径和Wnt信号传导途径。通过对靶基因的蛋白互作分析发现PCNA,RPL11和RPS13的富集程度最高,可能对调控羊绒细度有影响。从三种基因型中随机选择28个miRNAs对粗细型皮肤进行q PCR验证,结果显示miR-30a-5p,miR-30e-5p,miR-105a和miR-101可能调控羊绒细度。最后,预测这28个miRNAs的靶基因,其中CHRM2,FGL2,KRT26和GPR6可能对羊绒细度的调控有作用。2.羊绒细度关键基因KRT26的ceRNA调控网络构建和表达验证本研究利用RNA-seq技术,首先鉴定了LCG皮肤中存在的miRNAs,然后对LCG和内蒙古绒山羊(MCG)皮肤中表达的mRNAs、lncRNAs、circRNAs进行鉴定。结果,在LCG和MCG皮肤中,共鉴定出1222个差异表达的m RNAs,包括187个上调和1035个下调;得到170个差异表达的lncRNAs和32个差异表达的circRNAs。Lnc RNAs包括67个上调和103个下调,circRNA包括17个上调和15个下调。用q PCR进一步验证关键lncRNAs、m RNAs、circRNAs和miRNAs。此外,miRanda预测了lncRNAs、circRNAs、miRNAs和m RNAs之间的关系,并用Go和KEGG分析了其潜在的调控作用。通过对结果的筛选和分析,构建了调控羊绒细度的ce RNA网络。lncRNA-MSTRG.706.1,lncRNA-MSTRG.9947.1,lncRNA-MSTRG.5882.1,lncRNA-MSTRG.13983.1,lncRNA-MSTRG.10487.1,lncRNA-MSTRG.11754.1,lncRNA-MSTRG.10615.1与circ6691和miR-105a靶向KRT26。Lnc RNA MSTRG14109.1和circRNA452与miRNA-2330竞争,调控TCHH、KRT35和JUNB的表达。3.羊绒细度功能候选基因KRT26与产绒性能的相关性分析本研究通过对羊绒细度候选基因KRT26进行单核苷酸多态性(SNP)分析,检测到KRT26基因有7个多态位点:A310T,G317A,G326A,G410A,G502A,T672C和C704G。其中有6个为有效位点:A310T,G317A,G326A,G410A,G502A和T672C。根据基因替代效应分析位点与产绒性能的关系,进一步分析KRT26基因与羊绒细度的相关性。