在该试验中,采用单一因素实验和正交实验法,研究了用纤维素酶和果胶酶提取桔皮中有效成份黄酮类化合物的方法.试验结果表明,利用双酶分解桔皮细胞壁,从而有效提取黄酮类化合物是可行的.其最适的酶解条件为:双酶与底物比为C:P=120U:120U/2.000g,酶解温度为50℃,在pH=4.0的缓冲液中酶解1小时,对细胞壁进行破坏,然后在80℃下浸提90min,提取率为1.43％.同常规乙醇浸提方法相比,黄酮浸提率增加了81%.同时,以壳聚糖为载体,对纤维素酶和果胶酶同时进行双酶固定化.经单一水平实验,可得双酶的固定化率分别为:纤维素酶为55%、果胶酶为50%,半衰期分别为16天和21天.固定化条件为:5%的壳聚糖溶液与酶液在4℃下吸附3小时,用注射器将其注入3%的三聚磷酸钠中,成均匀球状白色胶粒,即为固定化凝胶粒子.该固定化双酶的最适酶解温度均为50℃,最适pH均为4.0.纤维素酶的热稳定性改善不大,而果胶酶的热稳定性有所提高;两种酶成分耐酸和耐碱性有所增加;Km值略有下降,即对底物的亲和力均有所增加.根据实验设计得出的游离酶解条件,以此为条件,对桔皮细胞进行游离酶、固定化酶和常规法提取,黄酮得率分别为:1.43%、0.94%和0.79%.与常规法相比,游离酶得率从0.79%提升到1.43%,效率显著.该项研究为纤维素酶和果胶酶应用于中药有效成份的提取提供了一个新的方法.同时,纤维素酶和果胶酶经双酶固定化后,酶学性质有所改善,扩大了双酶的应用范围.