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杆状病毒表面展示系统是近年来快速发展的一种真核生物表面展示系统,其主要原理是将外源基因与囊膜蛋白基因进行融合,导入昆虫细胞内进行融合表达,使外源蛋白在囊膜蛋白的介导下展示在重组杆状病毒囊膜或被感染的细胞膜表面。杆状病毒表面展示系统具有病毒滴度高、外源基因容纳能力大、翻译后修饰机制完善等优点,已广泛应用于基因呈递、癌细胞靶向攻击、单克隆抗体制备和新型多价疫苗研发等领域。杆状病毒表面展示系统中,常使用GroupⅠ型杆状病毒的GP64介导外源蛋白的融合展示,该蛋白具有分布极性,其受体位点仅存在于杆状病毒囊膜极性区域。病毒复制周期中,野生型GP64蛋白常与GP64融合蛋白之间发生强烈的竞争性抑制,引起杆状病毒表面展示效率低等缺点。为了有效解决杆状病毒的表面展示和基因呈递效率低等缺陷,本研究利用细菌内同源重组、双荧光素酶检测,Westren Blot鉴定和激光共聚焦断层扫描等技术,分别开展了突变型rSw106-inv菌株(Ac-Zeo-ph\Δp64)的构建、Ac-Zeo-ph\Δp64应用于重组杆状病毒的复制周期研究、Ac-Zeo-ph\Δp64应用于重组杆状病毒的表面展示效率检测和Ac-Zeo-ph\Δp64进行VSV-G介导的融合展示等研究,获得如下结果:1)Ac-Zeo-ph\Δp64的构建利用over-lap PCR技术构建出同源重组片段,电转化导入Invasin介导的DAP缺陷型Sw106受体菌E.coli AcMultiBac/Δasd Sw106/PGB2?Inv(野生型rSw106-inv菌株Ac),完成细菌内Red同源重组过程,成功构建了延迟rAcMultiBac中gp64基因表达的突变型rSw106-inv菌株Ac-Zeo-ph\Δp64。2)Ac-Zeo-ph\Δp64应用于重组杆状病毒的复制周期研究对突变型rAcMultiBac进行延迟表达野生型GP64蛋白等研究,结果表明延迟表达野生型GP64蛋白对重组杆状病毒复制周期无明显影响。3)Ac-Zeo-ph\Δp64应用于重组杆状病毒的展示效率检测将海肾荧光素酶报告基因和gp64基因进行融合,利用萤火虫荧光素酶报告基因作为内参基因,共同导入突变型rAcMultiBac,双荧光素酶检测技术对重组杆状病毒的表面展示效率进行检测。结果表明,应用突变型rSw106-inv菌株Ac-Zeo-ph\Δp64构建的重组杆状病毒可将表面展示效率提高约0.8倍。4)应用Ac-Zeo-ph\Δp64开展VSV-G介导的融合展示研究vsv-g基因的密码子使用偏好性分析结果表明,vsv-g基因在sf9细胞中具有较好的表达效果。利用Ac-Zeo-ph\Δp64成功构建了VSV-G介导的egfp展示重组杆状病毒。激光共聚焦扫描显微镜检测结果表明,VSV-G介导的外源蛋白均成功的展示在sf9细胞膜表面,Western Blot鉴定结果表明外源蛋白成功组装至子代杆状病毒。该研究成功构建了可应用于杆状病毒多基因高效展示系统的菌株平台,均有效解决了传统杆状病毒表面展示效率低的缺点;利用VSV-G介导的外源基因融合展示等研究,为重组杆状病毒广泛应用于非囊膜蛋白表面展示和非宿主细胞基因呈递等领域的研究奠定基础。