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放射治疗是目前临床上治疗恶性肿瘤的主要手段,射线在有效杀伤肿瘤细胞的同时,对正常组织也会产生一定辐射损伤的负面效应,可以引起机体一些细胞因子、酶类和基因表达的改变。远志皂苷B(Tenuigenin B,TB),系药材远志中存在的皂苷类物质,前期通过细胞和动物实验,揭示了其显著的辐射保护作用,鉴于TB的辐射防护作用已明确,但是其作用的靶点和信号转导途径尚不明确,所以,本实验利用X射线制备小鼠和细胞辐射损伤模型,来研究TB的辐射保护作用分子机制。 目的: 首先通过研究中草药远志皂苷B是否具有抗辐射作用,其次再利用生物信息技术综合分析、寻找及验证远志皂苷B的辐射防护分子机制。 方法: 建立胸腺辐射损伤模型,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测辐射后ROS的变化,观察TB对X射线8Gy照射后小鼠生存率有无影响,采用MTT法检测远志皂苷B是否对小鼠胸腺细胞有毒性,然后检测远志皂苷B对辐射后小鼠胸腺细胞活力的影响,采用彗星扫尾实验和DNA ladder实验观察TB对辐射细胞DNA的影响。 本课题以NF-κB和Caspase3为作用的分子靶点,选择对辐射较为敏感的免疫器官胸腺为研究对象,体内和体外研究互相结合,运用反向对接技术、KEGG Pathway、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫印迹分析Western Blot来研究TB通过调控NF-κB/Caspase3预防辐射损伤的分子机制。 结果: (1)TB具有辐射防护作用。 (2)TB辐射防护作用的分子机制。 ①TB可有效预防和减轻辐射损伤;②反向对接分析和KEGG信号通路分析发现TB与Caspase3靶点分子有较好的相关性,并得到预实验验证;③TB调控NF-κB信号通路;④Caspase3和NF-κB在辐射损伤发生后被激活;⑤TB能通过抑制NF-κB/Caspase3的激活而干预辐射损伤。 结论: TB可以降低对辐射对小鼠的损伤,即TB具有抗辐射作用。TB可能通过抑制NF-κB/Caspase3的激活而干预辐射损伤。