【摘 要】
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云芝（Corio1us versico1or）是一种分布广泛的食药用真菌,近年来的研究发现,云芝中所含的云芝多糖具有增强免疫力、抑制肿瘤、镇痛抗炎、保肝护肝、抗氧化、抗衰老等功效,这不仅
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云芝（Corio1us versico1or）是一种分布广泛的食药用真菌,近年来的研究发现,云芝中所含的云芝多糖具有增强免疫力、抑制肿瘤、镇痛抗炎、保肝护肝、抗氧化、抗衰老等功效,这不仅使云芝成为理想的药材,更使它成为保健食品及功能性食品的重要原材料。本实验将以江苏安惠生物科技有限公司提供的云芝AHSWYZ—07菌株为出发菌株,利用低能N+离子注入诱变云芝AHSWYZ-07菌株的原生质体,期望选育出一株云芝多糖高产新菌株,并对该新菌株的液体发酵进行了优化研究,以进一步提高云芝多糖的产量。本文选用溶壁酶去除云芝AHSWYZ-07的细胞壁,分别研究了菌龄、温度、时间、pH值等条件对制备云芝SY-1027菌株原生质体的影响,通过实验得知,当选择菌龄为5天的云芝AHSWYZ—07菌株,以0.6mol/L的蔗糖做渗透压稳定剂,在pH为6,温度为30℃C时,经2.00%的溶壁酶酶解5小时,所制备的原生质体数量最多,为8.31× 105 个/ml。通过不同浓度的低能N+离子注入诱变云芝AHSWYZ—07菌株的原生质体,发现其存活率曲线呈现典型的"马鞍形",印证了作者所做的本次低能氮离子诱变实验是可行且成功的。通过实验可得,当注入剂量为10 ×1014 ions/cm2,注入能量为20KeV时,诱变的效果最好。本实验通过对1143株诱变菌株的筛选,最终得到一株优良新菌株:云芝SY-1027菌株。在培养基配方为:葡萄糖4%,豆粕粉2%,磷酸二氢钾0.1%,硫酸镁0.05%,维生素B110mg/L,pH自然;发酵条件为:转速140转/min,温度28℃,接种量10%,装液量100mL/300mL,时间为培养6天的条件下培养,云芝SY-1027菌株的液体发酵生物量为21.92g/L,胞内多糖含量为2.27g/L,分别比云芝AHSWYZ-07菌株提高了16.22%和17.62%。在传代10代后,该菌株生物量和胞内多糖含量变化不大,说明该菌株遗传稳定性良好。在获得云芝SY-1027高产菌株的基础上,本文以胞内多糖为指标,用摇瓶发酵培养的方式,利用培养基单因素试验和培养基正交实验,对云芝SY-1027菌株的液体发酵培养进行了优化,确定了最佳培养基为:葡萄糖4.00%,玉米粉2.50%,豆粕粉1.75%,玉米浆干粉0.30%,磷酸二氢钾0.10%,硫酸镁0.08%,维生素B,10mg/L;最佳培养条件为:起始pH自然、转速140r/min、装液量100mL/500mL、接种量15%、温度28℃;发酵时间为6天。本实验室在上述培养条件下,对云芝SY-1027菌株进行液体发酵的生物量为28.13g/L,胞内多糖含量为2.94g/L,产量与液体发酵培养的优化前相比,分别提高了 28.33%和29.52%。
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