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背景与目的宫颈癌是妇科最常见恶性肿瘤之一,除HPV感染以外,被感染细胞的基因出现异常表达才能最终导致宫颈癌的发生发展。前期研究首次通过RNA-Seq技术,检测宫颈癌与癌旁组织的差异基因,发现视黄醇代谢相关基因LRAT和RDH12在宫颈癌组织和细胞中的表达明显低于癌旁组织。已有的体外实验证实:构建LRAT及RDH12过表达载体并转染宫颈癌细胞系,瞬时转染LRAT和RDH12后,能够抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭和迁移,阻滞宫颈癌细胞周期,增加凋亡率。这一现象与抑制MAPK及NF-kB信号通路有关。当LRAT及RDH12基因的表达升高时,宫颈癌细胞中MAPK及NF-kB通路中相关蛋白的表达水平有所下降。本课题拟在组织层面上,通过动物体内实验,进一步验证LRAT、RDH12基因与MAPK及NF-kB信号通路的关系。通过建立宫颈癌细胞的裸鼠移植瘤模型,分析稳定转染LRAT和RDH12基因的两种Hela细胞,在裸鼠中的成瘤情况。并对移植瘤组织的病理进行分析,探讨LRAT/RDH12与宫颈癌的临床病理因素的关系,旨在阐明LRAT/RDH12基因在宫颈癌进展中的作用及机制,为宫颈癌的防治提供新的理论支持和分子指标。方法一、培养稳定转染的细胞株:利用重组质粒,培养并获得稳定转染LRAT及RDH12基因的两种Hela细胞株。二、构建Hela细胞的裸鼠移植瘤模型:利用未做处理的对照组Hela细胞,探索裸鼠中最佳的Hela细胞成瘤浓度。将Hela细胞配置成5×106/mL、1×107/mL、5×107/mL和1×108/mL的单细胞悬液,4个浓度梯度下进行成瘤浓度探索。三、观察并记录裸鼠中Hela细胞的成瘤情况,记录肿瘤体积大小,绘制肿瘤生长曲线。四、对裸鼠皮下移植瘤进行取材,进行免疫组化切片。分析病理组织中,MAPK通路中p38及NF-kB通路中p50、p65的表达情况。结果培养并获得稳定转染LRAT、RDH12基因的两种Hela细胞系。经过qPCR验证,稳转的LRAT基因过表达倍数是空白对照的29360倍,稳转的RDH12基因过表达倍数是空白对照的39631倍。对培养获得的稳转细胞进行实验,发现稳转LRAT、RDH12基因的两种Hela细胞中,P38、P50、P65蛋白的表达水平均下调。裸鼠成瘤模型建立的实验中,成功找出Hela细胞在裸鼠中的最佳成瘤浓度为5×107/mL,并顺利构建Hela细胞的裸鼠移植瘤模型。观察肿瘤生长变化情况,对肿瘤大小进行比对分析,稳转LRAT、RDH12基因的两组Hela细胞,在裸鼠模型中的成瘤速度及肿瘤生长速度均慢于对照组,且LRAT组受抑制程度较RDH12组明显。对3组同周数的瘤体组织分别进行免疫组化染色实验及Western实验,表明在LRAT、RDH12两组实验组中,P38、P50、P65蛋白的表达水平均下降。LRAT、RDH12的过表达,会抑制MAPK、NF-kB通路的活性。结论LRAT与RDH12基因的过表达,能够有效抑制宫颈癌组织的生长,这一现象与抑制MAPK、NF-kB信号上的相关蛋白表达水平有关,过表达LRAT、RDH12基因可以抑制宫颈癌的发展,这两个基因有望成为宫颈癌治疗的新靶点。