【摘 要】
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牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）是牛病毒性腹泻-黏膜病（Bovine viral diarrhea-mucosal disease,BVD/MD）的病原体,主要引起牛腹泻、生殖障碍和呼吸道疾病,严重阻碍了牛养殖业的发展。BVDV已在世界范围内广泛传播,在中国BVDV也存在不同程度的流行,目前有关BVDV在中国西部的流行资料有限,因此,为了解西部地
【基金项目】
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国家自然科学基金（编号:31502035）；
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牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）是牛病毒性腹泻-黏膜病（Bovine viral diarrhea-mucosal disease,BVD/MD）的病原体,主要引起牛腹泻、生殖障碍和呼吸道疾病,严重阻碍了牛养殖业的发展。BVDV已在世界范围内广泛传播,在中国BVDV也存在不同程度的流行,目前有关BVDV在中国西部的流行资料有限,因此,为了解西部地区BVDV的流行情况,本研究先通过RT-PCR对西部四省（区）采集的牛血清样品进行核酸检测,明确BVDV的阳性率及亚型分布。然后,利用细胞分离培养、间接免疫荧光染色、透射电镜观察及噬斑试验等方法鉴定和纯化BVDV野毒株。研究取得以下结果:1.西部四省（区）BVDV的流行病学调查2019-2020年从西部四省（区）（陕西、宁夏、新疆和西藏）17个牛场采集1234份奶牛、肉牛及牦牛血清样本,根据BVDV的保守区5’UTR设计引物,利用RT-PCR对所有样品进行检测。结果表明,BVDV阳性率为7.2%（89/1234）,牛场阳性率为82.4%（14/17）,奶牛、肉牛和牦牛阳性率分别为42.70%（38/89）、33.71%（30/89）和10.77%（21/195）。陕西、宁夏、新疆和西藏的BVDV阳性率分别为4.57%（44/963）、30%（18/60）、37.5%（6/16）和10.77%（21/195）。对RT-PCR检测呈阳性的血清样品进行5’UTR基因测序,成功获取26个5’UTR序列,将获得的序列与Genbank中的参考序列进行比对,并构建遗传进化树进行基因分型,结果表明所有序列均为BVDV-1基因型,其中包括了三个基因亚型,分别为BVDV-1a（n=15）、BVDV-1c（n=9）和BVDV-1q（n=2）。BVDV-1a亚型分布在陕西（n=9）、新疆（n=3）、宁夏（n=1）和西藏（n=2）;BVDV-1c亚型分布在陕西（n=1）、宁夏（n=5）和西藏（n=3）;BVDV-1q亚型分布在宁夏（n=2）。选取部分样品进行Npro基因测序,成功获取的4个Npro序列基因分型结果与5’UTR一致。2.BVDV野毒株的分离鉴定将RT-PCR检测呈阳性的血清样品接种MDBK细胞进行病毒分离,然后通过RT-PCR检测、间接免疫荧光染色和透射电镜观察等方法进行鉴定,结果表明共获得了19株BVDV野毒株,其中15株为非致细胞病变型（Non-cytopathic biotype,NCP）,4株为致细胞病变型（Cytopathic biotype,CP）。进一步通过噬斑试验对4株CP型野毒株进行病毒纯化,最终纯化出2株,分别命名为SX-1-2/1a/2019和XZ-N1/1c/2020,按Reed-Muench法对其进行TCID50计算,分别为103.8和105.2。研究结果表明BVDV在西部四省（区）均有流行,流行的基因型为BVDV-1,流行的亚型为BVDV-1a、BVDV-1c和BVDV-1q。获得的2株CP型分离株为进一步研究BVDV致病性及免疫原性提供理论基础和实践意义。
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