甜瓜细菌性叶枯病由丁香假单胞菌黄瓜致病变种(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)引起,在世界范围内均会发生,造成不同程度的损失,近年来在中国逐渐发展严重,对果实产量带来严重损失。瓜类细菌性果斑病(bacterialfruit blotch)的病原菌被确认为西瓜噬酸菌(Acidovorax citrulli),是一种危害西瓜和甜瓜的世界检疫性种传病害。丁香假单胞菌和西瓜噬酸菌(Acidovorax citrulli)在西瓜和甜瓜上有着很相似的发病症状,我们用肉眼和传统的检验检疫方法是很难将两者区分开的。所以建立高效,快捷,操作简单的检测技术区分这两种病害是防止甜瓜细菌性叶枯病病原菌传播的有效手段。本研究采用腹腔免疫方式免疫小鼠,通过细胞融合技术获得杂交瘤细胞株,成功制备单克隆抗体。采用双抗体夹心模式,使用两个不同特异性的单克隆抗体,制备免疫层析试纸条。一种抗甜瓜细菌性叶枯病菌的单抗(b)被固定在硝酸纤维素膜检测区域,而另一种抗甜瓜细菌性叶枯病菌单抗(c)偶联到作为显色剂的胶体金粒子上。然后将植物样品溶液通过毛细管作用,与抗甜瓜细菌性叶枯病菌的抗体在检测区发生反应,使甜瓜细菌性叶枯病菌滞留在检测区域,从而出现红色结果。在定性检测中,本试纸条对甜瓜细菌性叶枯病菌的定性检测限为2.5×103cfu/mL,与细菌性果斑病菌不存在交叉反应,具有很强的特异性。在半定量检测中,甜瓜细菌性叶枯病菌在2.5×103 cfu/mL～105cfu/mL浓度范围内,T线和C线读数的比值与甜瓜细菌性叶枯病菌浓度的对数值呈显著的线性关系,线性方程y=0.3922x-1.2638,相关系数R2达到0.9881。因此本研究建立的双抗夹心免疫层析分析方法是一种准确、快速、简便、经济的甜瓜细菌性叶枯病菌检测方法。可用于田间实时原地对甜瓜细菌性叶枯病进行诊断。