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研究目的:胰腺癌的恶性度高,且进展迅速,临床病例中极易发生转移,临床统计中仅有20%左右的患者在就诊时有手术机会,其他的患者则大多只能接受姑息化疗,胰腺癌的五年生存期仅5%左右。因此胰腺癌是目前最难以治疗的恶性肿瘤之一,且目前尚无任何有效治疗可以延长患者的的生存期和改善预后。近年来分子靶向治疗在某些肿瘤治疗中取得了一定的进步,在本课题中探究了miR-25-3p对胰腺癌细胞的作用和胰腺癌细胞对iRGD修饰的外泌体的靶向摄取作用,并将二者结合探索其在胰腺癌靶向治疗中的应用,以期日后可以通过此种治疗方式改善胰腺癌患者的生活质量,延长患者的生存时间。研究方法及结果:1.胰腺癌患者血清miR-25-3p血清表达情况及其与患者生存期相关性PCR对比临床样本后发现胰腺癌患者较体检正常人血清中miR-25-3p的表达量高,且胰腺癌患者血清中miR-25-3p的表达量与患者生存期呈负相关。2.Mi R-25-3p对胰腺癌细胞侵袭迁移能力的影响PCR比较不同胰腺癌细胞系miR-25-3p表达量后选取miR-25-3p表达量适中的panc-1和Bx PC-3细胞系进行后续实验,划痕愈合实验和transwell实验显示miR-25-3p可促进胰腺癌细胞的侵袭迁移能力。3.外泌体装载的anti-miR-25-3p对胰腺癌细胞侵袭迁移能力的影响对不同处理组胰腺癌细胞进行transwell和划痕愈合实验后显示外泌体装载的anti-miR-25-3p可被胰腺癌细胞摄取并抑制胰腺癌细胞的侵袭迁移。4.构建iRGD肽段修饰的外泌体运载anti-miR-25-3p免疫荧光和western blot结果显示过表达3×FLAG-iRGD-CD63融合蛋白的外泌体构建成功,PCR结果显示iRGD肽段修饰且装载anti-miR-25-3p的外泌体构建成功。荧光显微镜观察到体外胰腺癌细胞对iRGD修饰且装载anti-miR-25-3p的外泌体呈高摄取趋势,小动物成像结果显示胰腺癌细胞在体内对iRGD修饰且装载anti-miR-25-3p的外泌体呈特异性高摄取。5.iRGD修饰的外泌体包裹anti-miR25-3p的胰腺癌治疗效果对胰腺癌原位模型小鼠治疗过程中发现iRGD修饰且包裹anti-miR-25-3p外泌体的治疗可减慢小鼠体重的下降;对小鼠肝脾组织的HE染色结果显示iRGD修饰且其中包裹anti-miR-25-3p的外泌体治疗可以显著抑制小鼠胰腺癌的肝转移和脾转移;对小鼠的心肺肾HE染色结果结果显示外泌体注射治疗会一定程度上导致小鼠心脏、脾脏等产生炎症反应,但对于小鼠心脏纤维化、脾细胞坏死、脾出血、肺出血等情况有一定的改善作用。研究结论:本课题中,胰腺癌患者血清中miR-25-3p呈高表达趋势,且miR-25-3p的表达水平与患者的生存期呈负相关。Mi R-25-3p可促进胰腺癌细胞的侵袭迁移能力。胰腺癌细胞在体内和体外均可对iRGD修饰的外泌体快速靶向摄取且在小鼠胰腺癌原位模型的治疗中iRGD修饰且其中装载anti-miR-25-3p的外泌体可以抑制小鼠胰腺癌的肝转移和脾转移。