论文部分内容阅读
目的:基于代谢/蛋白组学研究方法,以3月龄小鼠作为对照,研究20月龄小鼠血浆、脾组织、肾组织代谢轮廓与标志物的变化情况,结合肝线粒体差异蛋白的表达情况,解析衰老相关代谢/蛋白标志物、生物途径,及六味地黄丸对其干预作用,阐释衰老机制及六味地黄丸调节作用的生物学基础;为方证关系研究奠定基础。方法:在课题组前期研究基础上,选用3月龄为空白组,20月龄自然衰老小鼠随机分为模型组、给药组,每组20只(雌鼠10只,雄鼠10只)。给药组灌胃六味地黄丸药液;空白组、模型组灌胃相同体积生理盐水。连续灌胃30天后,制备血浆、脾、肾组织样本用于代谢组学分析;制备肝线粒体样本用于蛋白质组学分析。结果:1.PCA分析结果看出,给药组小鼠3种生物样本的代谢轮廓在三维空间内均远离模型组,并向空白组回调。2.血浆样本模型组与空白组比较,鉴定出与衰老相关代谢标志物雄性22个,雌性20个;与6条代谢途径相关。六味地黄丸可显著干预鉴定出的雄性中的11个、雌性中的6个标志物;六味地黄丸对6条衰老相关途径中的硒代氨基酸代谢;精氨酸和脯氨酸代谢;类固醇生物合成;嘧啶代谢等4条代谢途径具有调节作用。3.脾样本模型组与空白组比较,鉴定出与衰老相关代谢标志物雄性43个,雌性43个;与15条代谢途径相关。六味地黄丸可显著干预鉴定出的雄性中的40个、雌性中的23个标志物;六味地黄丸对15条衰老相关途径中的13条代谢途径具有调节作用。4.肾样本模型组与空白组比较,鉴定出与衰老相关代谢标志物雄性46个,雌性40个;与9条代谢途径相关。六味地黄丸可显著干预鉴定出的雄性中的17个、雌性中的12个标志物;六味地黄丸对已鉴定的9条衰老相关途径中的D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢;花生四烯酸代谢;生物素代谢;牛磺酸和亚牛磺酸代谢;丙氨酸,天冬氨酸和谷氨酸代谢;戊糖和葡萄糖醛酸的相互转化等6条代谢途径具有调节作用。5.对比模型组与空白组肝线粒体样本蛋白标志物的差异,筛选出衰老相关蛋白标志物雄性102个,雌性108个;主要与5条生物通路有关。六味地黄丸可以显著回调雄性其中的90个、雌性其中94个蛋白标志物;六味地黄丸对m TOR信号通路;阿尔茨海默病;花生四烯酸代谢;ECM受体相互作用;谷胱甘肽代谢等5条衰老相关生物通路具有调节作用。6.对代谢组学与蛋白质组学的研究结果进行系统生物学综合分析,发现六味地黄丸在两种组学研究中影响的相同通路主要为花生四烯酸代谢、谷胱甘肽代谢。结论:1.20月龄与3月龄相比,血浆、脾组织、肾组织样本代谢标志物存在显著差异,分别与6、15、9条衰老相关代谢途径有关。2.六味地黄丸对20月龄小鼠血浆、脾组织、肾组织样本代谢轮廓与标志物均具有明显回调作用。分别对其中已鉴定出的4、13、6条衰老相关代谢途径具有调节作用。3.20月龄与3月龄相比,肝线粒体样本蛋白标志物存在显著差异,主要与5条生物通路有关。六味地黄丸可以显著回调其中的蛋白标志物,对5条衰老相关生物通路具有调节作用。4.结合代谢组学与蛋白质组学的研究结果进行系统生物学综合分析,发现六味地黄丸在两种组学研究中影响的相同通路主要为花生四烯酸代谢、谷胱甘肽代谢。