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目的:研究来氟米特活性代谢产物A771726对大鼠胶原性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)的继发性炎症和免疫反应的影响,并以A771726对胶原性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响为重点,初步探讨其可作用机制。方法:建立鸡II型胶原诱导的大鼠关节炎模型;容积法检测大鼠足爪肿胀度并进行评分;HE染色法对关节组织作病理检查;ELISA法检测血清中抗II型胶原抗体、TNF-α的含量。MTT法检测T、B淋巴细胞增殖反应;中性红比色法测定A77 1726对CIA大鼠PMФ吞噬功能的影响;小鼠淋巴细胞增殖法检测腹腔巨噬细胞(perironeal macrophage,PMФ)白介素l(interleukin-1,IL-1)活性;ELISA法测定A77 1726对CIA大鼠PMФ分泌肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-6、IL-10和转化生长因子β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1)的影响;化学法检测A771726对CIA大鼠PMФ氧化应激的影响;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测A771726对CIA大鼠PMФ中TNF-αmRNA、IL-6 mRNA、IL-10 mRNA、iNOS mRNA、TGF-β1 mRNA、TLR4 mRNA表达的影响。Western blot检测A771726对CIA大鼠PMФTLR4蛋白表达的影响。结果:1、A771726能减轻CIA大鼠继发性关节炎症、调节机体的免疫功能,对大鼠CIA具有明显治疗作用CIA大鼠致敏后12d左右出现炎症反应,多发性关节炎指数较高,表现为对侧和前肢足爪肿胀,耳、尾出现炎性结节和红斑并伴有体重下降。继发性炎症高峰期在d22~d26,炎症在d26后开始减轻。与正常大鼠相比,光镜下可见CIA模型组大鼠的滑膜组织中滑膜细胞增生明显,层次增多,排列紊乱,滑膜下层纤维组织增生,炎性细胞浸润及血管翳形成,软骨中炎性细胞浸润,破坏软骨组织,同时还可见滑膜细胞的脂肪变性。治疗组均可不同程度改善以上变化,A771726 (3,6,12 mg/kg,d12～d34) ig给药能不同程度的减轻CIA大鼠的关节炎症;进一步研究表明,A771726 (3,6,12 mg/kg,d12～d34) ig能使CIA大鼠升高的ConA诱导的T细胞增殖和LPS诱导的B细胞增殖反应下降;并使CIA大鼠血清中升高的抗CII抗体和TNF-α下降。2. A771726体外给药对CIA大鼠PMФ功能的影响A771726体外给药(1、10μmol/L)可抑制CIA大鼠PMФ的分泌过高的IL-1、TNF-α和IL-6的水平,逆转CIA大鼠PMФ低下的IL-10、TGF-β1水平;与正常组相比,CIA大鼠PMФ生成MDA和NO的量明显升高,生成SOD的量减少,体外A771726(1、10μmol/L)给药可明显逆转CIA大鼠的氧化应激。以上结果提示:A771726(1、10μmol/L)体外给药,可有效降低CIA大鼠PMФ的分泌功能;显著改善CIA大鼠PMФ的氧化应激状态。3. A771726体外给药对CIA大鼠PMФTNF-αmRNA、IL-6 mRNA、IL-10 mRNA、TGF-β1mRNA、iNOS mRNA表达的影响A771726(1、10μmol/L)体外给药可显著降低CIA大鼠PMФ中TNF-αmRNA、IL-6 mRNA、iNOS mRNA表达,显著增加IL-10 mRNA、TGF-β1mRNA的表达。以上结果提示:A771726抑制CIA大鼠炎症性细胞因子的表达和减轻炎症反应。4. A771726体外给药对CIA大鼠PMФTLR4表达的影响与正常组比较,CIA大鼠PMФTLR4表达明显增高。与模型组比较,A771726(1、10μmol/L)体外给药可显著降低CIA大鼠PMФ中TLR4 mRNA的表达,并降低CIA大鼠PMФ中TLR4蛋白的表达。以上结果提示:A771726对CIA大鼠的治疗作用可能与其下调CIA大鼠PMФ中TLR4的表达有关。结论1 .A771726对CIA大鼠有明显治疗作用,其作用与调节机体的免疫功能有关。2. A771726可能通过调节腹腔巨噬细胞的功能,调节CIA大鼠异常的机体免疫功能。3.A771726能调节LPS刺激的CIA大鼠PMФ分泌功能与氧化应激,其机制是否与A771726抑制CIA大鼠LPS-TLR4信号传导通路有关值得进一步探讨。