本论文共包括三部分,第一章是单个生物分子的检测,第二章是全内反射荧光法检测溶液中单个抗体分子,第三章是无标准溶液作参比的绝对单分子计数定量分析法。 第一章对单分子检测的研究现状进行了综述。介绍了单分子检测的意义、原理、主要研究内容以及所使用的荧光显微镜的构造和原理,从单分子的追踪、分子构象动力学、马达蛋白的运动、离子通道、细胞信号转导、单分子酶学、特定序列核酸的单分子检测、单分子计数等方面介绍了单分子检测的现状、方法,本章共引用文献81篇。 第二章对全内反射荧光显微镜检测溶液中羊抗鼠IgG（H+L）单分子的方法进行了研究。讨论了在单分子成像中,降低杂质荧光的方法和激光功率、曝光时间等条件的选择。选择激光功率为2.4 kW,曝光时间为100 ms,将缓冲溶液过滤后再进行光漂白、对盖玻片进行光漂白,有效地降低了杂质荧光。使用全内反射隐失场激发,减小激发体积,并使用适宜的滤波片,提高了检测的灵敏度,采用高灵敏度的检测器ICCD可对PBS溶液中的单个羊抗鼠IgG（H+L）分子进行成像。使用两种方法对单分子进行了证明。在1.0×10^-10mol/L-4.0×10^-9mol/L的浓度范围内,检测到的单分子的数目与溶液浓度有良好的线性关系,这不但可作为单分子证明的依据,还可作为一种检测溶液浓度的方法。 第三章提出了一种新的检测溶液浓度的方法。将盖玻片使用环氧丙氧丙基三甲氧基硅烷处理,在玻片表面生成环氧集团,将Alexa488标记的羊抗鼠IgG（H+L）的PBS缓冲溶液滴在硅烷化的盖玻片上,静置30 min左右,待溶剂挥发后,溶液中的蛋白分子全都沉积在盖玻片表面,环氧集团可和蛋白分子中的氨基反应,从而将蛋白分子共价结合在盖玻片上。滴加蒸馏水,溶解掉结晶在盖玻片表面的无机盐,非常有效地去除了背景荧光,在此基础上利用全内反射荧光显微镜结合ICCD对固定在盖玻片表面的蛋白分子成像并计数,可直接计算出溶液的浓度。检测范围为浓度5.0×10^-15mol/L-5.0×10^-14mol/L。