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第一部分mi R-31转基因小鼠的构建目的:构建稳定过表达mi R-31转基因小鼠,对阳性小鼠心脏、肝、脑、脊髓等组织器官mi R-31表达进行检测,为研究mi R-31过表达在体内的应用提供合格稳定的工具鼠。方法:mi R-31转基因小鼠的构建及鉴定。利用Gatewayclone技术构建mi R-31过表达载体,把构建好的载体通过DNA显微注射技术移入受精卵内,接着将受精卵移植入假孕小鼠体内,随后等待母鼠自然生产。提取新出生小鼠尾部的DNA,利用Fsat-PCR和琼脂糖凝胶电泳技术鉴定筛选过表达mi R-31的转基因阳性小鼠,将遴选出的阳性鼠置于屏障环境中,标准饲养和交叉配种繁育,随时观察并记录相关基本数据。提取阳性转基因小鼠的心脏、肝、脑、脊髓等组织器官的micro RNAs,利用RT-PCR检测mi R-31的表达量。结果:成功构建了mi R-31转基因小鼠,其在各个生长阶段的身体长度、体重、毛发等基本生理体征与野生型FVB小鼠相比并没有差别。心脏、肝、脑、脊髓等mi R-31的表达均增高且稳定。结论:通过使用Gatewayclone技术成功建立了mi R-31过表达转基因小鼠,并且mi R-31的表达在各代小鼠中均增高且稳定,为探究内在过表达mi R-31对机体的影响提供合格稳定的工具鼠。第二部分mi R-31转基因小鼠的应用目的:1、检测并对比mi R-31转基因小鼠和野生型FVB小鼠脑室和脊髓中Nestin的表达量和NSCs数量,意在探讨内在过表达mi R-31对神经系统生理状态及疾病修复(小鼠脊髓损伤模型)的影响。2、对mi R-31转基因小鼠的应用进行扩展,研究内在过表达的mi R-31在免疫系统疾病(小鼠银屑病模型)中的调控作用。方法:1、提取mi R-31转基因小鼠和野生型FVB小鼠脑室和脊髓的Total RNA,利用RT-PCR检测脑室和脊髓中Nestin的表达量,利用免疫荧光方法检测脑室和脊髓中NSCs数量。2、利用咪喹莫特乳膏对mi R-31转基因小鼠和野生型FVB小鼠进行银屑病模型制作,对mi R-31下游靶基因进行预测筛选,在银屑病模型刚出现症状时(第3天)和最严重时(一般5-8天,默认为第7天)检测皮损组织处mi R-31及筛选靶基因的表达,并对筛选靶基因进行western blot检测。另外,解剖后观察两组小鼠脾脏的变化状况。结果:1、RT-PCR检测结果表明,mi R-31转基因小鼠脑室和脊髓中Nestin的表达量高于野生型FVB小鼠;免疫荧光结果表明,mi R-31转基因小鼠脑室和脊髓中NSCs的数量也比野生型FVB小鼠高。2、咪喹莫特乳膏诱发两个实验组小鼠均产生银屑病表型,具体表现为涂抹区域出现红斑、银白鳞屑,表皮增厚等,经造模图片对比发现mi R-31实验组较野生型FVB实验组银屑病样症状轻。RT-PCR结果显示mi R-31的表达在野生型FVB小鼠组中升高,在mi R-31转基因小鼠组中却降低,靶基因Sfn、Su Fu的表达则是相反结果。western blot结果与PCR结果一致。经解剖发现,两个实验组小鼠脾脏均出现淤血肿大现象,但mi R-31转基因小鼠的脾脏淤血肿大程度较野生型FVB小鼠弱。结论:1、mi R-31转基因小鼠脑室和脊髓中的NSCs数量多于野生型FVB小鼠,为进一步探究内在过表达mi R-31对机体神经系统的影响及神经系统相关疾病(小鼠脊髓损伤模型)的修复提供便捷。2、内在过表达mi R-31对免疫系统疾病的调控作用,在银屑病动物模型中,mi R-31转基因小鼠由于其皮肤银屑病样症状较弱及脾脏淤血肿大症状较轻,我们推测内在过表达mi R-31因其调控作用而减弱银屑病严重程度。Sfn、Su Fu作为mi R-31下游靶基因,可抑制银屑病的发病进程。为进一步研究内在过表达mi R-31对免疫系统的影响及免疫系统相关疾病的调控提供基础。