抗菌肽Cecropin B对人膀胱癌T24细胞的生长抑制作用研究

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目的:观察抗菌肽Cecropin B对人膀胱癌T24细胞生长增殖的抑制作用并探讨其产生抑制作用的可能机制。方法:(1)采用人膀胱癌T24细胞株及人脐静脉内皮细胞株细胞体外培养法。(2)我们运用丝裂霉素C作对照,设立抗菌肽Cecropin B组(CB)、丝裂霉素C组(MMC)和抗菌肽Cecropin B+丝裂霉素C组(CB+MMC)三组药物,将药物分别配制成C1=15ug/mL、C2=30ug/mL、C3=60ug/mL、C4=120ug/mL和C5=240ug/mL五个药物浓度梯度,运用MTT比色法检测三组药物分别对人膀胱癌T24细胞生长增殖的抑制作用及其作用特点。(3)运用MTT比色法测定上述五个浓度的抗菌肽Cecropin B对人脐静脉内皮细胞的抑制作用及其作用特点。(4)运用流式细胞仪检测不同浓度抗菌肽Cecropin B(0、5、20、140ug/mL)作用人膀胱癌T24细胞和人脐静脉内皮细胞24h后细胞周期的变化。(5)运用扫描电镜观察240ug/mL抗菌肽Cecropin B作用于膀胱癌T24细胞24 h后细胞膜表面变化。结果:(1)抗菌肽Cecropin B组、丝裂霉素C组和抗菌肽Cecropin B+丝裂霉素C联合组抑制人膀胱癌T24细胞增殖均呈剂量相关性,随着抗菌肽Cecropin B、丝裂霉素C和抗菌肽Cecropin B+丝裂霉素C联合组浓度的增加,对人膀胱癌T24细胞增殖的抑制率也逐渐增加;抗菌肽Cecropin B与丝裂霉素C两种药物同样对人膀胱癌T24细胞有明显的抑制作用(P<0.05),但两者抑制率之间无统计学差异(P>0.05),而抗菌肽Cecropin B+丝裂霉素C联合组作用人膀胱癌T24细胞24h后显著增强对人膀胱癌T24细胞的抑制率(P<0.05)。(2)抗菌肽Cecropin B对脐静脉内皮细胞无明显抑制作用(P>0.05)。(3)不同浓度抗菌肽Cecropin B(0、5、20、140ug/mL)作用于人膀胱癌T24细胞24 h后,G0/G1期T24细胞所占比例著上升(P<0.05),G2/M期T24细胞所占比例显著下降(P<0.05),随着抗菌肽Cecropin B浓度的增加,G0/G1期T24细胞所占比例逐渐上升,G2/M期T24细胞所占比例逐渐下降,而对人脐静脉内皮细胞细胞周期无明显影响(P>0.05);(4)扫描电镜显示浓度为240ug/mL抗菌肽Cecropin B作用24 h后人膀胱癌T24细胞细胞膜出现大小不等的空洞、甚至有的T24细胞膜出现碎裂。结论:(1)抗菌肽Cecropin B和丝裂霉素C对人膀胱癌T24细胞生长增殖均有明显的抑制作用,但两者对人膀胱癌T24细胞的抑制作用无明显差异,而抗菌肽Cecropin B与丝裂霉素C联合后显著增强对人膀胱癌T24细胞生长增殖的抑制作用。(2)抗菌肽Cecropin B对人膀胱癌T24细胞产生重要的可选择的抑制细胞活性及抗增殖效应,而对人脐静脉内皮细胞无明显影响。(3)抗菌肽Cecropin B对人膀胱癌T24细胞生长增殖抑制作用的机制至少部分依靠调节人膀胱癌T24细胞周期,促使人膀胱癌T24细胞周期阻滞于G0/G1期;另外,抗菌肽Cecropin B能够促使人膀胱癌T24细胞膜的裂解。(4)抗菌肽Cecropin B对人膀胱癌T24细胞具有显著的抑制作用,而对人脐静脉内皮细胞无明显影响,与MMC联合应用显示了很强的抗膀胱癌协同作用,这使其可能有望成为非肌层浸润性膀胱癌患者膀胱内灌注治疗很有潜力的药物。
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