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目的： 环氧化酶(COX)是前列腺素(PGs)合成的限速酶，环氧化酶-2(COX-2)是其中的一种异构体。脑胶质瘤目前的治疗以手术切除为主，辅以放疗、化疗和生物治疗的综合疗法。但脑胶质瘤，尤其是胶质母细胞瘤的复发率高，五年的生存率低。本文研究的目的是探讨脑胶质瘤细胞中环氧化酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)和八因子相关抗原(Ⅷ-R Ag)的表达，探讨COX-2在脑胶质瘤发生和发展中的功能和促血管生成的作用。 材料和方法： 1．收集浙江大学医学院附属第一医院神经外科1996年6月-2002年3月手术治疗的62例胶质瘤病人(其中男性37例、女性25例)的手术标本，其中胶质母细胞瘤(Glioblastoma，GBM)23例，间变胶质细胞瘤(Anaplastic Astrocytoma，AA)20例和星形胶质细胞瘤(Astrocytoma，A)19例。年龄4-71岁，平均年龄38．12岁，(GBM46．87岁，AA36．80岁，A29．63岁)。正常脑组织对照3例，(其中男性2例、女性1例)，平均年龄33．67岁，取至脑外伤后内减压的病人。 2．Western blot检测COX-2蛋白 取冷冻肿瘤标本，用组织裂解液溶解。标本在99-100℃中加热5分钟，每一个加 浙江大学医学院硕士学位论文COX－二在人脑胶质瘤中的表达和促血管生成作用研究 样孔中的蛋白总加样量为50卜g，在12％的聚丙烯酚胺凝胶上电泳，再转移蛋白到硝酸 纤维膜（PVDF membrane）上，用抗 COX－2抗体检测（鼠抗人 COX－2的单克隆抗体）， 再加 HRP耦合的羊抗鼠二抗反应，最后用 ECL显色，记录到胶片上。 3．免疫组化（S．P法） 常规S－P免疫组化法，每次染色设置阳性、阴性及空白对照。 抗体；鼠抗人＊＊＊－2的单克隆抗体；兔抗人＊＊＊F多克隆抗体：兔抗人八冈于相 关抗原（皿－R Ag）多克隆抗体。 一抗稀释度；鼠抗人COX－2的单克隆抗体1：300，兔抗人VEGF多克隆抗体1： 50，兔抗人八因于相关抗原（皿－R Ag）多克隆抗体 1：200。 4．运用SPSS10．0软件对所得到的结果进行统计分析。 结果： Western blot检测 3例正常脑组织和 9例胶质瘤标本，发现其中都有 COX－二蛋白的 表达，但表达量存在差异。用免疫组化技术检测，在正常脑组织中，发现在少数神经 元细胞的胞浆有COX－2染色阳性；在脑胶质瘤细胞中，发现有肿瘤细胞的胞浆染色， 但染色比例和强度存在差异，并有颗粒样染色等许多种染色形式；在坏死区域周围有 COX．2的高表达的肿瘤细胞积聚；在肿瘤组织的新生血管内皮细胞也发现有COX．2在 胞浆的阳性染色，肿瘤组织中的血管周围有COX－2染色阳性的肿瘤细胞聚集。VEGF 在肿瘤细胞的胞浆染色，染色指数在正常脑组织和肿瘤之间存在差异，并且染色指数随 着肿瘤恶性度的升高而增高。微血管密度在星形胶质细胞瘤分布较为均匀，间变性胶质 细胞瘤组织中微血管密度有明显的升高，在胶质母细胞瘤组织中分布差异很大，一些微 血管分布较均匀，另一些微血管分布极不规则，肿瘤组织微血管密度明显增高，微血管 密度随着肿瘤级别的升高而升高。统计实验数据发现人脑胶质瘤标本中COX－2染色的 免疫活性指数和WHO的胶质瘤的分级成正相关，在胶质母细胞瘤、间变性胶质细胞瘤 和星型胶质细胞瘤这三型胶质瘤的＊0x2表达有显著性差异：＊0X2的表达和＊＊6F 的表达成正相关，COX－2和MVD成正相关；COX－2的表达和病理分级成正相关。 2浙江大学医学院硕士学位论文COX－2在人脑胶质瘤中的表达和促血管生成作用研究结论： l）COX－2在各级别的脑胶质瘤细胞中有表达，和脑胶质瘤的发生和发展有关系； 2）COX－2在肿瘤的坏死区周围有强表达，在肿瘤细胞的凋亡和死亡过程中起作 用： 3）COX－2在肿瘤的新生血管内皮上有表达，在血管周围有COX－2阳性的肿瘤细 胞积聚，可促进肿瘤组织新生血管的生成： 4）COX－2可作为判断脑胶质瘤恶性度的辅助生物学标志。