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目的:通过观察大鼠纹状体内单胺类递质在脑缺血后的动态变化,以及治疗干预后多巴胺能神经元的物质结构变化和大鼠功能恢复情况,探讨电针治疗脑缺血再灌注损伤的部分神经生物学机制。该研究结果将进一步丰富“康复药理学”的理论,阐释电针和多巴胺DA工具药的作用特点。
方法:采用微透析“给药-采样”联用的方法,运用高效液相技术,体感诱发电位技术等,在将DA工具药作用于纹状体及电针治疗的同时,观察其中DA浓度的变化和体感诱发电位的变化,结合免疫的方法双重标记多巴胺能神经和生长相关蛋白等,观察脑缺血后纹状体内DA能神经元在可塑性中的作用,并探讨电针促进神经可塑性改变的重要作用环节。
结果:
一、神经功能量表评分结果
DIR拮抗剂或电针干预后的大鼠与模型组和DIR激动剂组相比,神经功能缺损评分前后相差较大(P<0.05),其平衡功能及前后肢的反应灵敏度等均有较好的恢复(P<0.05)。
二、SEP波幅的动态变化
1、各组N1-P2波均在缺血即刻出现波幅迅速下降(P<0.05),在治疗后均有不同程度的恢复。
2、电针组和DIR拮抗剂组治疗后N1-P2波幅较术后恢复明显(P<0.05)。
三、纹状体内DA、DOPAC及HVA含量的变化
造模后各组大鼠与正常组相比纹状体内DA、DOPAC及HVA含量的变化:
DA:
1、电针组大鼠DA含量波动较平稳,模型组波动较大。
2、给予DIR拮抗剂后,DA含量波动较平稳,实验结束前DA含量在基础水平附近。
3、DIR激动剂组出现较高的DA峰(P<0.05),实验结束时仍保持较高水平。DIR激动剂与电针联用后,将DA的代谢调节到基础水平。
DOPAC:
1、各组大鼠纹状体的DOPAC含量变化差异较大,模型组DOPAC含量水平较高,波动较大。电针组DOPAC含量波动后开始趋向平稳。
2、给予DIR拮抗剂后,调节DOPAC含量向基础水平发展。
3、给予DIR激动剂后,DOPAC的含量持续低于基础水平,实验结束时仍处于较低水平,与正常组有显著差异(P<0.05)。DIR与电针联用后,可以明显促进DOPAC向基础水平方向发展。
HVA:
1、各组大鼠HVA含量变化差异较大,模型组短暂上升后急剧下降。电针组稍低于基础水平,变化较平稳。
2、给予DIR拮抗剂的组别,纹状体内HVA的水平不断向基础水平靠拢,实验结束时达到基础水平附近。
3、给予DIR激动剂组的组别,纹状体内HVA的水平有较大波动,实验结束时仍然远离基础水平(P<0.05)。
4、实验结束时,DIR激动剂+电针组的HVA含量明显高于电针组(P<0.05)。应用DIR拮抗剂的组别与电针组差异不大(P>0.05)。
DOPAC/DA:
1、模型组大鼠纹状体DOPAC/DA的值在实验结束时仍高于基础水平,电针组大鼠的DOPAC/DA值接近基础水平。
2、给予DIR拮抗剂后,大鼠纹状体DOPAC/DA的值持续低于基础水平,DIR拮抗剂与电针联用后,DOPAC/DA的值趋于基础水平。
3、给予DIR激动剂后,大鼠纹状体内DOPAC/DA的值波动较大,实验结束前仍远离基础水平,DIR激动剂与电针联用后,DOPAC/DA的值调节到基础水平附近。
HVA/DA:
1、电针组波动较小,实验结束时HVA/DA的值恢复到基础水平,模型组实验结束时HVA/DA的值稍低于基础水平。
2、应用DIR拮抗剂后,大鼠纹状体HVA/DA的值波动较小,实验结束时达到基础水平附近。
3、应用DIR激动剂后,大鼠纹状体HVA/DA的值波动较大,实验结束时仍与基础差异较大。
DOPAC+HVA/DA:各组DOPAC+HVA/DA值的变化趋势与DOPAC/DA值的变化趋势相似。
四、DIR、GAP-43和TH的免疫组化结果
DIR:
1、应用DIR拮抗剂或电针的组别,DIR含量明显高于模型组(P<0.05)。
2、电针组的DIR含量明显高于DIR激动剂组(P<0.05)。
GAP-43:
1、应用电针或DIR拮抗剂后,大鼠纹状体内GAP-43表达明显高于模型组(P<0.05)。
2、应用DIR激动剂的组别,大鼠纹状体内的GAP-43表达与模型组差异不大(P>0.05),但DIR激动剂与电针联用后,GAP-43表达升高。
TH:
1、应用DIR拮抗剂或电针的组别,TH含量与模型组相比较高(P<0.05),接近正常组的水平(P>0.05)。应用DIR拮抗剂的组别和电针组相比,TH含量没有明显差异(P>0.05)。
2、应用DIR激动剂后,TH含量与模型组没有明显差异(P>0.05)。DIR激动剂+电针组的TH含量高于DIR激动剂组(P<0.05)。
结论:
1、电针风池穴可调节大鼠脑缺血再灌后DA的紊乱以及电活动的异常,改善整体的神经功能,对于脑缺血后神经可塑性有良性的影响。
2、DIR拮抗剂可以促进大鼠脑缺血再灌注后的康复,与电针表现出类似的效果。
3、电针与DIR拮抗剂分别应用或联合应用表现出近似的效果,没有叠加效应。
4、DIR激动剂可能加重大鼠脑缺血再灌注后的DA能神经元损伤,其与电针联用时,可以有效的缓解DA能神经元的损伤程度。
5、微透析给药-采用联用技术的效果直接,为大鼠脑局部直接给药提供了新的思路。