蓝莓花青素、多酚类物质的分离纯化与生物活性研究

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本文选择蓝莓中花青素和多酚类化合物两类活性物质进行研究,以不同的提取工艺对两者进行提取,采用AB-8大孔吸附树脂纯化粗提物,共获得蓝莓花青素粗提物、多酚粗提物、花青素纯化物和多酚纯化物四种物质。进行了体外抗氧化、体外抗肿瘤、体内抗肿瘤和免疫功能研究。通过总还原能力检测(FRAP)、清除DPPH和ABTS自由基三种方法对四种提取物进行了抗氧化性比较,发现纯化后的花青素和多酚类物质的抗氧化活性显著提高(P<0.05),同时在相同浓度下花青素抗氧化活性高于多酚类化合物。采用MTT法进行体外抑制乳腺癌细胞(MDA-MB231)增殖能力的分析,结果表明,四种提取物对MDA-MB231细胞具有明显的抑制作用,在实验选取浓度范围内呈现出明显的剂量效应关系,花青素和多酚粗提物抑制肿瘤增殖能力较强(P<0.05)。两种纯化物体外抑制肿瘤增殖的能力较低,这与体外抗氧化分析结果不同。在体外细胞实验基础上,以环磷酰胺为阳性对照,应用四种提取物对乳腺癌CD-1小鼠模型进行抗肿瘤实验。结果表明,三个剂量组的四种提取物对肿瘤抑制能力虽然低于环磷酰胺药物组,但均具有一定程度的抑制作用。同时显著提高小鼠体重、胸腺和脾脏指数、巨噬细胞吞噬能力、脾淋巴细胞转化能力和体内SOD活性(P<0.05),减少肝组织MDA和血清NO的积累,其中多酚和花青素粗提物混合物效果最好,说明蓝莓提取物在有效抑制肿瘤增长的同时能显著提高小鼠的免疫功能和身体机能。应用高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS),对纯化后蓝莓花青素和多酚类化合物进行物质组成和结构的分析,发现在花青素中主要含有天竺葵素-3-O-半乳糖苷、槲皮素-3-O-半乳糖苷和锦葵色素-3-O-葡萄糖等花色苷,在多酚类物质中主要含有槲皮素-3-O-半乳糖苷和表儿茶素等物质。在这些化合物中,大部分物质含有3-O-己糖或戊糖苷这种结构。研究结果为综合评价蓝莓花青素和多酚活性,揭示其抗肿瘤机制奠定理论基础。
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