NLRs(nucleotide-binding domain,leucine-rich repeat containing receptors)是病原识别受体家族(pathogen recognition receptors,PRRs)的重要成员,PRR通过感知与病原体相关的分子模式(pathogen-associated molecular pattems,PAMs)来识别入侵的病原体,它们在先天免疫中起着重要的作用。近年来,有学者对斑点叉尾鮰(Ictalurus Punctatus)NLR-A亚家族(NOD)基因(包括NOD1、NOD2、NLRC3、NLRC5和NLRX1)进行了克隆和特征分析,并研究了爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)诱导下各个基因的表达情况,然而在斑点叉尾鮰的养殖实践中除了爱德华氏菌外,还有多种病原都给斑点叉尾鮰养殖业带来了巨大的损失,本文选取了最具代表性的几种细菌和病毒——迟钝爱德华氏菌(Edwardsiellatarda)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、链球菌(Streptococcus iniae)和斑点叉尾鮰呼肠孤病毒(Channel Catfish Hemorrhage Reovirus,CCRV)分别对斑点叉尾鮰进行感染实验,通过实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法检测了NOD亚家族中各个基因在健康的斑点叉尾鮰的12种不同组织中以及在感染几种病原后的肝脏、脾脏、肠和头肾中的时空表达特征,探讨它们与斑点叉尾鮰先天免疫反应的关系。同时,本文还通过荧光原位杂交技术对NOD1和NOD2两个重要基因进行了染色体定位研究,以便从染色体水平更加直观的进一步了解这些基因,为将来对NODs基因的深入研究打下基础。此外,本文还对斑点叉尾鮰BIRC7基因进行了克隆和表达分析,首先用RACE方法克隆了斑点叉尾鮰BIRC7基因(CcBIRC7),并用qRT-PCR技术检测了该基因在不同组织中以及在分别感染迟钝爱德华氏菌、链球菌和斑点叉尾鮰呼肠孤病毒后在头。肾、肝脏和脾脏中的表达情况。本研究的主要结果如下:　　1.斑点叉尾鮰NODs基因在细菌和病毒感染后的表达特征　　所有的NODs基因在健康鱼体的12种组织中(脏、脾脏、肠、头肾、血、后肾、胃、心脏、脑、鳃、肌肉和皮肤)持续而广泛的表达,其中在血、肌肉、鳃、心脏中的表达量较高。除了在感染嗜水气单胞菌和斑点叉尾鲴呼肠孤病毒后在脾脏中的表达与对照组相比呈现下调外,感染所有的四种病原后,NOD1,NOD2,NLRC3,NLRC5在肠、肝脏和头肾中都表现为大幅度的上调表达。NLRX1的表达在肠、肝脏和头肾中上升而在脾脏中下降。在四种不同的病原中,革兰氏阳性菌链球菌最能引起NODs各基因的上调表达,且上升幅度最大,而斑点叉尾鮰呼肠孤病毒只能引起轻微的上调表达。从不同的组织来看,NODs在肝脏中的表达变化最大,其次是头。肾,肠,最后是脾脏。将NOD亚家族的五种基因进行比较,结果发现NOD2的表达上调最为强烈,而NLRX1相对来说变化幅度不大。所有的这些数据都说明,NODs在参与斑点叉尾鮰先天免疫反应过程中表现出了明显的组织特异性和病原特异性,同时各基因在受到细菌和病毒诱导后有着相似的表达模式,表明了它们在抗细菌和病毒过程中具有协同作用,为NODs基因在斑点叉尾鮰先天免疫中的重要性增添了有力的证据。　　2.斑点叉尾鮰BIRC7的克隆和感染不同病原后的表达分析　　斑点叉尾鮰BIRC7基因(CcBIRC7)cDNA序列全长1686 bp(GenBank登录号为JQ268267),包括1194 bp开放阅读框,93 bp5非翻译区以及含poly(A)信号的399 bp的3非翻译区,编码398个氨基酸。CcBIRC7基因包含有两个BIR(baculoviral IAP repeats)保守结构域和一个指环结构。氨基酸序列同源性分析表明,CcBIRC7基因推测的氨基酸序列与罗非鱼、斑马鱼BIRC7氨基酸序列的同源性分别为68.0％和62.3％,与其他物种的BIRC7氨基酸序列的同源性为38％-50％,表现为中度保守。qRT-PCR分析结果表明,CcBIRC7基因广泛表达于健康斑点叉尾鮰的12种不同组织中,其中在血液中的表达量最高。迟钝爱德华氏菌和链球菌都能显著诱导CcBIRC7基因的表达,与细菌相比,斑点叉尾鮰呼肠孤病毒对CcBIRC7基因的诱导作用较为微弱,在脾脏中甚至抑制了该基因的表达。从表达结果中可以看出,BIRC7基因在斑点叉尾鮰的先天免疫系统中特别是在抵御细菌入侵方面发挥了重要的作用,关于BIRC7基因在鱼类中的克隆和表达分析本文尚属首次报道。　　3.斑点叉尾鮰NOD1和NOD2基因的染色体定位　　采用BAC-FISH技术对NOD1和NOD2基因进行了染色体定位,结果发现,它们各定位于一对同源染色体上,其中NOD1基因定位在染色体长臂的末端,而NOD2基因则定位于染色体长臂的中部。这个结果印证了先前的报道中Southern blot杂交显示NOD1和NOD2均为单拷贝基因的结果。