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目的:探究他克莫司通过下调miR-429抑制人成纤维细胞增殖来预防瘢痕粘连的作用及其潜在的作用机制。方法:为了确定术后瘢痕组织中miR-429的表达情况,我们将取自人体术后瘢痕组织中提取的RNA进行了qRT-PCR检测;并将体外培养的人成纤维细胞,分别用0μM和50μM浓度的FK-506溶液处理24h,也采用qRT-PCR检测用两者结果分析他克莫司作用对人成纤维细胞中miR-429的影响。采用Western-blot检测了人瘢痕成纤维细胞在转染miR-429模拟物和对照物后PTEN表达量的变化。通过在线miRNA靶点预测数据库,预测了潜在的miR-429的靶标基因PTEN,并依据预测的位点构建了PTEN’3-UTR的野生型、突变型质粒,之后采用双荧光素酶报告检测确定miR-429和PTEN的靶向关系。将FK-506作用的成纤维细胞分为浓度组(0,5,10,25,50,100μM)和时间组(0,12,24,36,48,60h),通过CCK-8实验检测FK-506对体外培养的人成纤维细胞增殖活性的影响。将经过FK-506处理和miR-429慢病毒转染的成纤维细胞进行不同分组(对照组,FK-506组,miR-429组,FK506+miR-429组,antimiR-429,FK506+antimiR-429),进行Edu检测和Western-blot检测来验证miR-429对人成纤维细胞增殖的影响。最后,使用PTEN抑制剂抑制成纤维细胞中PTEN的表达后,再用FK-506处理,之后用Edu法检测细胞的增殖率,Western-blot检测人成纤维细胞中PTEN相关蛋白以及下游增殖关联蛋白表达量的影响,以确定PTEN在增殖中所起的作用。结果:qRT-PCR的结果显示,术后瘢痕组织中miR-429相对正常组织明显增多,用50μM的FK-506处理的人成纤维细胞中miR-429的水平显着低于对照成纤维细胞中的水平,这表明FK-506可以下调人成纤维细胞中miR-429的表达。双荧光素酶报告基因共转染试验的结果显示,hsa-mir-429在检测的293T细胞中对含PTEN-3’UTR的基因抑制率为50.5%,P<0.05,因此对其表达有抑制作用。而对含PTEN-Mut-3’UTR的基因表达水平没有抑制作用,表明miR-429可以靶向抑制人成纤维细胞中PTEN的基因表达。根据CCK-8的实验结果分析表明,随着FK-506药物浓度的增加,细胞的增殖活性降低而当细胞随着FK-506作用时间的延长,其增殖活性也会越来越低。在Edu染色增殖检测实验中,结果显示,FK-506可以引起成纤维细胞增殖减少,FK-506和转染miR-429抑制物处理后,可以使得人成纤维细胞增殖比率相比对照组明显减少,而通过转染miR-429模拟物到人成纤维细胞中,FK-506引起的细胞增殖减少会被部分逆转。使用PTEN抑制剂后相比对照组增殖的抑制效果被部分的减弱了。在Western-blot实验的研究结果中,细胞经过miR-429模拟物,抑制物转染后,结果显示FK-506和miR-429的下调处理可以使得PTEN的表达量相比对照组明显增加,Cyclin D1的表达量明显减少,而这些变化会因miR-429模拟物转入细胞中而部分的被逆转。使用PTEN抑制剂后,相比对照组CyclinD1的表达量增加,说明FK-506通过下调miR-429可以调控PTEN及下游增殖相关蛋白Cyclin D1的表达。结论:FK-506可以下调人成纤维细胞中miR-429的表达来抑制其增殖从而预防术后瘢痕粘连,而其可能的作用机制是通过靶向PTEN基因。