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猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus, PRRSV)是能够引起猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS)的一种具有传染性的病毒,该病毒主要造成仔猪呼吸障碍和母猪流产。PRRSV易变异,是单股正链RNA病毒,可引起猪的持续性感染和免疫抑制,具有抗体依赖性增强作用(Antibody-dependent enhancement,ADE),因此研究PRRSV的ADE作用感染机制对PRRS的防治具有重要意义。FcγR可分为激活型和抑制型两种,而FcγRⅡB是目前发现的唯一的抑制型的受体,在天然免疫和适应性免疫反应中发挥调节作用。本研究通过研究免疫复合物经FcγR途径增强PRRSV增殖作用,为进一步深入研究免疫复合物对PRRSV-ADE的调节作用机制提供理论依据。本研究以不同浓度非感染性免疫复合物分别处理猪肺泡巨噬细胞(PAM细胞),经PRRSV感染48h后用已建立的PRRSV SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法检测感染细胞中病毒RNA。结果显示,当非感染性免疫复合物作4倍和8倍稀释时,PRRSV的复制水平较病毒感染组略为升高,说明免疫复合物能经FcγR以非剂量依赖性方式增强PRRSV复制。本试验用5倍稀释鼠抗猪FcγRⅡB抗体特异封闭PAM细胞表面FcγRⅡB受体,经不同浓度的非感染性免疫复合物与病毒的混合物感染PAM细胞48h后用同样的方法检测感染细胞中病毒RNA。结果显示,2倍(2.635mg/mL)稀释的免疫复合物在FcγRⅡB被封闭的情况下同样能明显的促进病毒增殖,表明免疫复合物可通过激活型FcγR增强病毒复制。在上述试验基础上,又选择4倍稀释的免疫复合物(1.30mg/mL)分别于感染前、感染后、或与病毒同时来处理PAM细胞,感染12h、24h、36h和48h后用实时定量PCR方法检测感染细胞中病毒RNA。结果显示,非感染性免疫复合物在感染12,24和36h时间段内均能明显促进病毒的增殖,但在48h后不显著。说明免疫复合物在感染36小时内促进病增殖效果最强。本研究以4倍稀释的免疫复合物处理PAM细胞,处理12h、24h、36h和48h后用相对荧光定量PCR方法分别检测PAM细胞中IFN-α、IL-10和TNF-α的mRNA水平,结果显示,在处理24,36和48h时间段内,免疫复合物均能降低IFN-α和IL-10的mRNA水平,但和正常细胞相比没有明显差异,而TNF-α的mRNA水平较正常细胞略为升高。本试验以4倍稀释的免疫复合物分别于感染前、感染后、或与病毒同时来处理PAM细胞,用相对荧光定量PCR方法分别检测PAM细胞中IFN-α、IL-10和TNF-α的mRNA水平。结果显示,在感染48h后,免疫复合物能明显升高PRRSV诱导的IFN-α和TNF-α的mRNA水平,但在36h前没有明显规律,而在各时间段内,均能降低IL-10的mRNA水平。说明免疫复合物经FcγR调节PRRSV诱导的细胞因子转录没有明显规律,这可能是因为免疫复合物同时能与激活型和抑制型FcγR结合造成的。本研究用5倍稀释鼠抗猪FcγRⅡB抗体封闭PAM细胞,经PRRSV感染12h、24h、36h和48h后用实时定量PCR方法检测感染细胞中病毒RNA,同时用相对荧光定量PCR方法分别检测各组PAM细胞中IFN-α、IL-10和TNF-α的mRNA水平。实验结果显示,在感染12和24h时间段内,封闭组中病毒复制水平略低于病毒感染组,但差异不显著。而在感染36h时间段内,病毒的复制水平明显升高,但在48h时间段内,病毒的增殖与病毒感染组相比变化不明显。说明FcγRⅡB的选择性激活对PRRSV增殖的影响表现为先抑制后促进。同时在病毒感染各时间段内,封闭组中IFN-α和TNF-α mRNA水平均高于病毒感染组,而IL-10的mRNA水平则明显下降,且显著低于病毒感染组。说明FcγRⅡB的选择性激活在PRRSV感染的免疫反应中能增强抗病毒因子的水平。以上结果也说明PRRSV在细胞内增殖可能并不完全与细胞内抗病毒因子的水平直接相关,这暗示PRRSV在PAM细胞内复制存在更复杂的作用机制。