论文部分内容阅读
目的分析锌对变应性鼻炎（AR）小鼠模型血清中IgE水平和鼻黏膜中炎性细胞因子表达的影响,以及对P38MAPK信号通路活化的调控作用,探讨锌在抑制AR小鼠炎症反应中的作用及其机制。方法（1）给予BALB/c雄性小鼠不同含锌量（含锌10mg/4057千卡、30mg/4057千卡及90mg/4057千卡）的饲料喂养,构建锌正常（ZN）、锌缺乏（ZD）、缺锌补锌（ZS）和锌过量（ZE）动物模型,电感耦合等离子体原子发射光谱法（ICP-AES）检测血清中锌含量,评估模型构建情况;（2）在上述模型基础上用OVA+Al（OH）3致敏建立AR小鼠模型,采用行为学评分评估模型构建情况;（3）锌缺乏AR小鼠腹膜内注射P38MAPK通路抑制剂SB203580（ZD+SB）1月后取材,以明确P38信号途径在锌调控AR小鼠炎症反应中的作用;（4）采用ELISA法检测血清中IgE、OVA-s IgE和IL-6、TNF-α的表达情况;Western blot、荧光免疫组化和RT-q PCR法检测小鼠鼻黏膜中IL-6、TNF-α、通路蛋白P38MAPK及其磷酸化蛋白p-P38MAPK的表达情况。结果1.不同含锌量小鼠模型评估ICP-AES结果显示:ZE组血清锌浓度（1.2020±0.0040）最高（P＜0.01）,ZD组锌浓度（0.4013±0.0067）最低（P＜0.01）;与ZD组相比较,ZS组（0.7133±0.0025）补锌后血清浓度显著增高（P＜0.01）。2.AR小鼠模型建立行为学评分小鼠行为学评分结果显示:与ZN组（6.900±0.8756）比较,ZD组总分值（8.300±0.4830）最高（P＜0.01）,ZE组总分值（5.600±0.6992）最低（P＜0.01）;与ZD组比较,ZS组（6.700±0.8233）补锌后总得分显著降低（P＜0.01）。3.锌对AR小鼠血清IgE和OVA-s IgE水平的影响通过ELISA检测血清中IgE发现,与ZN组（4.473±0.1419）比较,ZD组血清IgE（10.930±0.2899）显著升高（P＜0.01）,ZE组血清IgE（3.517±0.1258）含量最低（P＜0.01）;与ZD组比较,ZS组补锌后血清IgE（4.103±0.0379）显著降低（P＜0.01）。同样,OVA-s IgE在ZD组（18.480±0.3729）明显高于其他组（P＜0.01）,而在其他锌治疗组中较低,尤其是ZE组（8.867±0.5155）（P＜0.05）。4.锌元素对AR小鼠炎症细胞因子表达的影响1)ELISA检测结果显示:与ZN组IL-6（106.60±2.653）、TNF-α（463.10±13.820）比较,ZD组血清IL-6（122.30±2.621）、TNF-α（606.30±16.450）显著升高（P＜0.01）,ZE组血清IL-6（80.13±3.170）、TNF-α（314.60±13.720）含量最低（P＜0.01）;与ZD组比较,ZS组补锌后可以显著降低血清中IL-6（106.10±4.628）和TNF-α（447.70±12.570）含量（P＜0.05或P＜0.01）。2)应用RT-qPCR检测发现,ZD组鼻黏膜中IL-6、TNF-α的mRNA转录水平较ZN组显著升高（P＜0.05）,ZE组中IL-6、TNF-α转录水平最低（P＜0.05）;与ZD组比较,ZS组补锌可以显著降低鼻黏膜中IL-6和TNF-α的mRNA转录水平（P＜0.05）。3)Western blot结果表明,炎症细胞因子的蛋白表达水平变化与mRNA转录水平的趋势一致。4)免疫组织化学检测发现,与ZN组比较,IL-6的阳性率在ZD组中表达最高（P＜0.01）,在ZE组中表达最低（P＜0.01）;与ZD组比较,ZS组补锌后其阳性率显著降低（P＜0.05）。5)荧光免疫组织化学结果显示:IL-6蛋白在ZD组中表达最高,ZE组中最低。5.锌对AR小鼠P38MAKP通路激活的影响1)Western blot结果显示:与ZN组比较,P38蛋白磷酸化（p-P38）水平在ZD组中显著增加（P＜0.05）,ZE组中相对表达量最低（P＜0.01）;与ZD组比较,ZS组补锌后可明显抑制P38蛋白的磷酸化（P＜0.05）。2)免疫组织化学结果显示:与ZN组比较,p-P38的阳性率在ZD组中表达最高（P＜0.05）,在ZE组中表达最低（P＜0.05）;与ZD组比较,ZS组补锌后其阳性率显著降低（P＜0.01）。3)荧光免疫组织化学结果显示:p-P38蛋白在ZD组中表达最高,ZE组中最低。6.SB203580对锌缺乏AR小鼠鼻黏膜中P38MAPK通路的影响SB203580作为P38MAPK的选择性抑制剂,用于验证P38MAPK的生物学功能。本实验中对ZD组AR小鼠腹膜内注射SB203580持续1月,Western blot、荧光免疫组织化学及免疫组织化学结果表明,ZD+SB组鼻黏膜中P38的磷酸化水平较ZD组显著降低（P＜0.01）。7.SB203580对锌缺乏AR小鼠体内炎症细胞因子的影响1)ELISA结果显示:与ZD组比较,ZD+SB组IgE、OVA-s IgE和IL-6、TNF-α的血清浓度显著降低（P＜0.01）。2)IL-6和TNF-α的mRNA转录及蛋白表达水平的变化与ELISA结果一致（P＜0.01）;此外,免疫组化及免疫荧光检测还发现,SB203580处理后,可显著降低缺锌引起的IL-6表达升高（P＜0.01）。结论1.缺锌促进AR小鼠血清中IgE、OVA-s IgE和IL-6、TNF-α水平升高,以及鼻黏膜中IL-6和TNF-α的表达,补锌后显著抑制上述炎性细胞因子的表达。2.缺锌促进AR小鼠鼻黏膜组织中P38MAPK蛋白磷酸化,补锌后P38MAPK通路活性明显受到抑制。3.锌缺乏AR小鼠用SB203580治疗后,不仅抑制缺锌诱导的P38MAPK蛋白活化,而且降低炎症细胞因子IL-6和TNF-α的分泌。4.锌元素通过抑制P38MAPK通路对变应性鼻炎小鼠起免疫保护作用。