一株来源于奶山羊肠道的产果胶酶菌株的分离及其特性研究

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饲料是动物养殖业的基础,植物性饲料占常规畜禽饲料的90%,随着人们对畜产品需求量的不断增大,植物性饲料的应用也越来越受关注。果胶广泛存在于植物细胞中,在细胞壁中的含量最多,为植物细胞提供了保护作用,抑制营养物质的释放;果胶还具有较强的粘度,阻碍食物在动物胃肠道中的蠕动;果胶吸水膨胀,形成凝胶,使得消化酶与食物的接触率下降,容易造成动物消化不良。利用相关酶提高植物性饲料的利用率,降解植物饲料的果胶酶,已成为饲料研究中的热点之一。本研究从健康的山羊粪便中分离出一株产果胶酶的菌株,并对该菌株进行鉴定和特性研究,通过高通量测序,挖掘可用的生物学信息,克隆表达果胶酶基因,探究果胶酶的酶学特性。奶山羊粪便梯度稀释后在紫外下诱导,经过初筛,复筛,分离出一株产果胶酶的菌株HZ-6,发酵液的酶活可达36.8 U/m L。经过生理生化特征研究,形态学和分子生物学鉴定,初步判定该菌株是Bacillus velezensis。高通量测序结果显示,该菌株HZ-6的基因组大小为4,082,976 bp,GC含量46%,使用Prodigal预测编码基因,总共有6295个基因数目。通过COG与GO数据库将全基因进行分组注释,果胶酶蛋白的细胞定位为未知,通过CAZy数据库得到菌株的碳水化合物活性酶注释信息,其中果胶酶属于多糖裂解酶类。将果胶酶基因克隆表达,果胶酶蛋白在IPTG终浓度为0.75 m M,24℃条件下,诱导10 h时,表达量最高。果胶酶的最适p H为4.0,最适温度为50℃,果胶酶在保温4 h后,p H 2条件下,果胶酶还保存有20%的酶活力,p H 6.5条件下,果胶酶还保存有70%的酶活力。金属Zn2+对果胶酶的抑制作用最强,Ca2+对果胶酶的促进作用最强。在酶解实验中,果胶酶对青贮饲料的干重没有太大影响,但是可以有效分解饲料,产生还原糖。本研究对进一步开发利用果胶酶处理饲料具有积极的意义。
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