慢病毒介导的ATF5基因沉默及其对荷人卵巢癌裸鼠移植瘤增殖的影响

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目的:将慢病毒介导的ATF5-siRNA注射入人卵巢癌裸鼠移植瘤内,观察慢病毒介导的人转录激活因子5(ATF5)基因沉默效果,及其对荷人卵巢癌裸鼠移植瘤增殖及凋亡的影响。方法:1.取对数生长期的SKOV-3细胞,并且皮下注射于裸鼠右侧腋窝,建立荷人卵巢癌裸鼠移植瘤模型。接种人卵巢癌细胞7天后,将30只裸鼠随机分为3组,分别为:(1)空白对照组:瘤内注射PBS100μ1/(只·次);(2)阴性对照组:瘤内注射空载慢病毒100μ1/(只·次);(3)实验组:瘤内注射ATF5-siRNA慢病毒100μ1/(只·次)。观察裸鼠的一般情况,包括饮食、睡眠、活动、精神状态等,定期测量移植瘤的长径及短径,计算移植瘤的体积,并绘制移植瘤生长曲线,4周后处死裸鼠,取出肿瘤组织并称重移植瘤的重量,计算抑瘤率。2.采用RT-PCR及Western-blot的方法检测各组肿瘤组织中ATF5mRNA及蛋白的表达情况,采用TUNEL法检测移植瘤组织的凋亡情况。结果:1.实验组巾移植瘤的生长速度明显落后于阴性对照组及空白对照组,实验组中移植瘤的重量及体积均明显低于空白对照组及阴性对照组(P<0.01)。实验组抑瘤率49.60%。2.实验组与空白对照组及阴性对照组相比,ATF5mRNA及蛋白的表达水平均明显下降(P<0.01),提示慢病毒介导的ATF5基因沉默可以显著干扰ATF5基因的表达。3. TUNEL结果显示,ATF5基因沉默后能显著引起移植瘤组织的凋亡:ATF5-siRNA慢病毒实验组凋亡指数为(34.63±1.91)%,空白对照组为(5.07±0.20)%,阴性载体组为(6.04±0.19)%,实验组的凋亡率明显增高,且差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:将携带ATF5-RNAi的慢病毒注射入SKOV3裸鼠移植瘤内,可使移植瘤组织内ATF5的表达明显沉默,并能够有效地抑制裸鼠移植瘤的增殖,促进移植瘤组织的凋亡。RNA干扰抑制ATF5的表达有望成为基因靶向治疗卵巢癌的一种有效手段。
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