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伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)是α疱疹病毒亚科的重要成员之一,具有神经嗜性和潜伏感染性,给养猪业造成巨大的经济损失。病毒感染宿主后miRNA在疱疹病毒的生活史及病原宿主互作中起到非常重要的调控作用。目前关于PRV体外的研究大多使用PK-15细胞,而在神经细胞上的研究很少见到。本研究旨在建立PRV感染小鼠脑神经瘤细胞(Neuro-2a)的细胞感染模型并测定miRNA表达谱,并对病原与宿主互作的可能机制进行探讨。用PRV感染Neuro-2a细胞后,通过细胞病变观察、TCID50测定、PCR及间接免疫荧光实验,评估了PRV在Neuro-2a内的增殖情况。结果显示,PRV感染后,Neuro-2a产生典型的细胞病变;经TCID50测定发现随着时间的推移,病毒滴度逐渐增高;PCR及间接免疫荧光试验显示PRV可在Neuro-2a上增殖。表明该PRV可适应Neuro-2a细胞,它可用于研究PRV感染、潜伏感染以及致病机制。建立检测PRV IE180、EP0、VP16表达水平的荧光定量方法(qRT-PCR),并用于检测PRV分别感染PK-15细胞及Neuro-2a细胞(MOI=5)后0h、2h、4h、6h,IE180、EP0、VP16的相对表达量。结果表明,在两种不同的细胞内PRV IE180、EP0、VP16的表达趋势存在差异,提示PRV感染上皮细胞及神经细胞时采用的“策略”存在差异。用Solexa测序技术及stem-loop qRT-PCR鉴定PRV感染Neuro-2a细胞后miRNA表达谱。利用生物信息学方法,分析宿主及PRV miRNA针对病毒靶基因的调控网络图以及病毒感染对宿主mi RNA表达谱的影响。高通量的结果显示,4h实验组中检测到PRV编码的mi RNA共7种,分别为prv-miR-LLT1、prv-miR-LLT2、prv-miR-LLT4、prv-miR-LLT5、prv-miR-LLT6、prv-miR-LLT10a、prv-miR-LLT10b。这些miRNA的表达量都很低。28h实验组中检测到PRV编码的miRNA共10种,比4h实验组多出3种,分别为prv-miR-LLT3、prv-miR-LLT11a、prv-miR-LLT11b。28h实验组中PRV编码的miRNA表达量均上调。miRBase数据库中公布的PRV编码的13种miRNA,prv-miR-LLT7、prv-miR-LLT8、prv-miR-LLT9在4h和28h实验组中均未表达。通过比较可知PRV感染Neuro-2a细胞后,有4种宿主mi RNA(miR-146b-5p、miR-714、miR-466k、miR-6538)在感染后4h上调表达。感染后28h时,7种miRNA(miR-301a-3p、miR-1249-3p、miR-6538、miR-714、miR-19a-3p、miR-101c、miR-99b-5p)差异表达,其中只有miR-99b-5p下调表达,其余上调表达。相对于4h实验组,在28h实验组中PRV编码的miRNA,仅有prv-miR-LLT1的表达量显著上调。用stem-loop qRT-PCR方法验证了高通量测序结果的可靠性。差异表达miRNA靶基因GO分析结果表明,宿主miRNA调控的基因主要影响细胞组分、分子功能及生物学过程;Pathway分析结果显示宿主miRNA调控的基因主要参与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)信号通路、促分裂素原活化蛋白激酶信号通路、神经信号传递通路、肌动蛋白细胞骨架调节通路、焦点粘连。用差异表达的宿主及病毒miRNA和病毒靶基因做基因网络图显示宿主及病毒生物miRNA可靶向多个病毒靶基因形成复杂的网络。同时根据测序数据预测到小鼠的多条miRNA,但仍需要实验进一步验证。上述的研究结果为进一步深入研究miRNA调控α疱疹病毒的嗜神经性,潜伏感染性及免疫逃避等奠定了基础。