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水稻是世界重要的粮食作物,由稻黄单胞菌稻致病变种引起的细菌性维管束病害-水稻白叶枯,在发病严重时能极大的影响水稻产量和质量。挖掘新的抗病基因进而培育新抗病品种是目前控制该病害的有效途径。分布在世界各地的野生稻是栽培稻遗传改良的天然基因库。已有报道显示疣粒野生稻的抗逆性是比较强的。为了有效筛选抗病基因,我们以接种白叶枯病菌和模拟接种的疣粒野生稻为材料,构建了全长均一化的cDNA的植物表达文库,并采取单克隆测序单基因转化的方法来研究疣粒野生稻的基因。我们在对测序结果分析时,发现一个与栽培稻中OsWRKY7高度同源的基因,我们将其命名OmWRKY7。依据测序结果,我们用RT-PCR的办法克隆到OmWRKY7和OsWRKY7的CDS序列。WRKY家族在植物抗病过程中具有重要作用,对OsWRKY7和OmWRKY7的基因功能的研究有助于了解WRKY7基因在水稻抗白叶枯病中的作用。1.OsWRKY7和OmWRKY7基因的表达特性分别构建OsWRKY7和OmERKY7基因的亚细胞定位载体,观察到基因OsWRKY7和OmWRKY7在水稻原生质体主要分布于细胞核。为了解基因的组织表达特异性,采用定量PCR对OsWRKY7在野生型日本晴的不同组织表达量的进行了分析,实验结果表明基因在根、茎、叶和花均有表达,在叶片中的表达最高。为了了解OsWRKY7是否参与响应激素和环境胁迫,用激素SA、IAA和KT等和NaCl处理野生型日本晴植株。24小时后,提取处理植株的叶和根的总RNA并逆转录为cDNA。定量PCR检测发现经激素IAA处理24h后,基因OsWRKY7在叶中的表达量高于对照组。经KT处理后基因在根中的表达量也高于对照组。经NaCl处理后基因在叶和根中的表达量与对照相比都有增强。推测基因可能参与了植物应对KT、IAA和盐渍胁迫的应答途径。2.OsWRKY7的启动子分析依据NCBI中的水稻基因组序列从野生型日本晴中扩增到OsWRKY7基因的部分启动子序列,命名为OsWRKY7p。将其放到启动子分析网站上进行搜索和扫描,预测到了多个胁迫响应元件。通过构建相应的表达载体pOsWRKY7-GUS,并采用农杆菌介导的转基因技术获得相应的转基因植株。对转基因植株进行GUS化学组织染色分析,结果显示,幼苗期的花、叶片和根均有GUS活性。并且WRKY7的表达可受到激素IAA、KT和病原菌Xoo的诱导。我们推测WRKY7参与了激素信号途径和响应Xoo的抗病途径。3.OsWRKY7和OmWRKY7抗病性研究基因的超表达是研究基因功能的有效办法,我们将构建的OsWRKYR和OmWRKY7基因超表达载体转入野生型日本晴中,然后对T1代的阳性植的抗病性进行了初步检测。实验结果表明,OmWRKY7基因的超表达材料的病斑长度短于对照组,这表明OmWRKY7基因很可能参与水稻抗白叶枯病。