基于SSR分子标记的小豆品种鉴定体系建立及应用

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小豆(Vigna angularis(Willd)Ohwi&Ohashi)起源于中国,是豇豆属(Vigna)的一个栽培种,染色体组为2n=22。小豆是我国重要的食用豆类作物,种质资源丰富,截至2008年,国家种质库保存量近5000份,但来源较为复杂,存在大量“同名异种”和“一品多名”种质。小豆已列入我国农业植物品种保护名录,近年来新品种保护申请量不断增加,但我国小豆育种亲本较为单一,少数骨干亲本重复利用,导致现有品种间遗传背景逐渐狭窄。小豆尚未列入非主要农作物品种登记目录,市场准入管理缺失,加之小豆育种家的知识产权保护意识较低,不利于育种工作的长远发展。本研究基于SSR分子标记,建立一套小豆品种的快速、准确鉴定体系,对于小豆品种特异性(Distinctness)、一致性(Uniformity)和稳定性(Stability)测试(简称DUS测试)测试中准确筛选近似品种,以及加强小豆种子市场监管都具有重要意义。主要研究结果如下:1.小豆SSR分子标记鉴定技术体系及品种指纹数据库构建筛选出28对条带清晰、稳定性好、多态性高的SSR核心引物,该套核心引物PIC值在0.246~0.877之间,平均为0.583,在182份小豆品种中共检测到245个等位变异,等位变异数范围为2~20个,平均每对引物检测到8.75个等位变异。建立了基于SSR标记的小豆品种鉴定技术体系,构建了182份小豆品种的DNA指纹数据库。2.182个小豆品种的遗传多样性分析利用28对核心引物对182个小豆品种的遗传分析显示,各品种间的遗传距离在0~0.911之间,平均值为0.619。基于Nei’s遗传距离的聚类分析结果表明,28对核心引物能区分173个小豆品种,所有供试品种可分为3个类群,从分子聚类结果来看,基于分子的遗传距离划分与品种间的地理来源具有一定相关性。3.SSR指纹数据库辅助筛选DUS测试近似品种的可行性分析对分子指纹不能区分的8个品种进行田间种植对比鉴定,结果表明,组内品种间表型性状无明显差异,组间品种可相互区分。根据品种的定义,这些不能区分的品种可能为“姊妹系”或“一品多名”。分子鉴定结果与表型鉴定结果一致,验证了本套引物适合在DUS测试中辅助筛选近似品种,避免重复授权。
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