2003年5月在广东阳春采集到的斜纹夜蛾幼虫期单一内寄生蜂，经陈家骅先生鉴定属于中国侧沟茧蜂属一新种，被定名为双斑侧沟茧蜂(膜翅目：茧蜂科：小腹茧蜂亚科)MicroplitisbicoloratusChen(Hymenoptera：Braconidae：Microgastrinae)。 双斑侧沟茧蜂是斜纹夜蛾幼虫的单一内寄生蜂，这种寄生蜂作为斜纹夜蛾潜在的生防因子首次在中国繁殖成功，本文对双斑侧沟茧蜂的产卵特性、幼虫期的发育及其对寄主斜纹夜蛾幼虫发育的影响进行了研究，并对其防治潜力进行了评估。在雌蜂一生的产卵实验中，雌蜂的产卵时间长达10d，产卵量明显集中于产卵的前几天：产卵的第一天能产出全部卵量的1/3，前三天就能产出全部卵的50％。这种迅速的产卵特性增加了迅速控制害虫种群的潜力。在温度27±1℃，相对湿度60％-80％，光照12：12h的条件下，双斑侧沟茧蜂未成熟期在其寄主斜纹夜蛾幼虫体内的发育需要7天：卵在24h内孵化，1龄幼虫2d，2龄幼虫3d，3龄幼虫到蛹的形成经过1d。被寄生后寄主的发育明显被抑制。当寄生蜂完成发育时，无论任何龄期被寄生的寄主，体重都明显降低。研究结果表明，双斑侧沟茧蜂是斜纹夜蛾幼虫有潜力的生防因子。 双斑侧沟茧蜂携带寄生蜂多分DNA病毒(Microplitisbicoloratuspolydnavirus，MbPDV)，它主要通过多分DNA病毒基因在寄主体内的表达来抑制寄主的免疫反应，以此逃避寄主血细胞对幼虫的包囊反应。 寄生蜂和昆虫杆状病毒是害虫综合治理中非常重要的生防因子。它们常被同时用于对目标害虫的防治，本研究中，我们对斜纹夜蛾核多角体病毒和双斑侧沟茧蜂多分DNA病毒共同感染同一寄主后，对寄主细胞免疫功能的影响进行了研究。当斜纹夜蛾幼虫感染斜纹夜蛾核多角体病毒后，再被双斑侧沟茧蜂寄生，寄生蜂发育到1龄幼虫时被寄主血细胞包囊致死。在自然寄生和注射多分DNA病毒与毒液的混合物后，斜纹夜蛾幼虫血细胞发生了凋亡。然而，流式细胞仪对不同处理后的血细胞凋亡率的检测表明，先感染斜纹夜蛾核多角体病毒能抑制由双斑侧沟茧蜂多分DNA病毒诱导的寄主血细胞的凋亡，随着斜纹夜蛾核多角体病毒感染时间的延长，血细胞的凋亡率降低。进一步的离体实验表明，斜纹夜蛾核多角体病能够抑制由双斑侧沟茧蜂多分DNA病毒诱导的寄主粒细胞的凋亡。在被两个病毒感染的寄主中，粒细胞的凋亡被抑制，破坏了由多分DNA病毒对寄主的免疫抑制作用，导致了寄生蜂幼虫被寄主血细胞包囊。 肌动蛋白(actin)单克隆抗体Westernblot显示，寄生后寄主血细胞的细胞骨架被破坏，不能检测到42kDa的肌动蛋白。通过部分克隆的Mbcrp基因的类富半胱氨酸胰岛素抑制剂结构域(cysteine-richtrypsininhibitor-likedomain，TILD)，检测到Mbcrp基因在被寄生后寄主血细胞的转录本；从寄生后第1d持续到第7d寄生蜂完成在寄主体内的发育，第6d和7d的表达量最大，Westernblot能检测到约30kDa蛋白的表达。TILD(命名为MbCRP1)和绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein，GFP)基因gfp融合在Bac-to-Bac系统中，重组进BacmindDNA，获得重组病毒reAcG(recombinantbaculovirusesAc-GFP)和reAcMG(recombinantbaculovirusesAc-MbCRP1-GFP)。重组病毒reAcMG感染粉纹夜蛾Trichoplusiani细胞系Hi5，MbCRP1的转录在感染后6h一直持续到实验的终点72h，Westernblot显示，从寄生后12h起就能检测到34.1kDa的CRP1-GFP的融合蛋白，48h蛋白表达量最大，72h明显降低。与此同时，用actin单克隆抗体检测发现，感染后6、12和24h均能检测到42kDa的肌动蛋白，48h后，检测不到42kDa的肌动蛋白；反之，对照组用重组病毒reAcG从感染后6h起到72h均能检测到42kDa的肌动蛋白。通过激光共聚焦荧光显微镜观察到，被reAcMG感染的Hi5细胞，在感染48h后，完全失去了贴壁作用，细胞均悬浮在培养基中，而对照组被reAcG感染的Hi5细胞则仍然附着在细胞培养皿底部，说明MbCRP1的表达，破坏了Hi5的细胞骨架。CRP1-GFP的融合蛋白分布在细胞质内，单独的荧光蛋白GFP则均匀地分布在被感染细胞的细胞质和细胞核内。综合所有实验结果表明，Mbcrp基因的表达与42kDa肌动蛋白被破坏相关。根据Mbcrp基因在细胞内的定位，推测该蛋白可能是一个与肌动蛋白相互作用的蛋白，深入的理论研究仍需要进行。同时，含有寄生蜂多分DNA病毒基因的重组杆状病毒reAcMG是否可以用于害虫生物防治，则需要从杀虫毒力和环境安全等方面进行研究。