禽流感(AI)是由禽流感病毒(AIV)引起的多种禽类(野禽和家禽)及鸟类呈现出轻度的呼吸道症状或者急性败血症特征的疾病。在禽流感的众多亚型中,世界上主要以H9N2亚型流感为主。该病毒的宿主范围较广,主要感染家禽、野禽、人等,其中野禽被作为H9N2AIV的天然储存库。由于H9N2亚型流感病毒属于低致病性禽流感,野禽感染该病毒后,往往表现出无症状或仅表现出轻微症状,但肉眼观察不到。随着野鸟的迁徙,把病毒传递到不同地区和不同的动物体内,导致该亚型流感病毒的暴发。因此对野禽尤其是野鸟的H9N2亚型流感病毒的监控和防治就显得尤为重要。本研究在2016-2017年间的野禽流感病毒进行分子流行病学调查,不仅对分离鉴定的22株H9N2亚型流感病毒进行全基因组扩增和序列测定,同时对测序结果进行系统进化分析,了解了H9N2亚型流感病毒在野禽体内的遗传变异规律;对其中分离的8株H9N2亚型野禽流感病毒的HA基因进行受体亲和特性鉴定,分析其受体的结合特性;同时,选择现行的两种商品化H9N2亚型流感灭活疫苗进行免疫及攻毒试验,了解现行疫苗对流行毒株的免疫保护能力,为H9N2亚型流感病毒的防控提供参考依据。1、在2016-2017年间,从湿地及自然保护区等地采集样品,共采集野禽粪便及棉拭子样本1194份,通过分离鉴定获得96份野禽流感病毒的阳性样品,其中H9亚型流感样品26份,H5亚型流感样品为2份,H7亚型流感样品9份。从获得的26份H9N2亚型样品中选取不同宿主、不同时间的22株野禽分离株进行全基因组扩增和序列测定,并与基因数据库的参考毒株基因进行比对分析,绘制进化树,分析其遗传变异规律。结果表明,该实验分离株之间的内部基因存在差异,各分离株虽然处在不同的分支,却均属于欧亚谱系的Y280-like亚系。从进化树总体来看,随时间推移,H9N2亚型流感毒株发生了基因重排或重组,导致基因变异,出现新的毒株。2、为了研究所分离毒株的受体结合性,本研究选取了8株H9N2亚型流感病毒野禽分离株进行研究,通过对病毒的包被、加入受体、与具有生物素标记的酶作用、再加底物等步骤进行固相酶联试验,完成受体亲和特性鉴定。结果显示,这8株野禽分离株均具有与两种唾液酸受体结合的能力,其中3株病毒株与人型唾液酸受体的结合能力强于禽型唾液酸受体的结合能力,表明3株病毒具有感染人的可能,但不能说明一定能够感染人类。3、为了验证现行疫苗对当前流行的H9N2亚型流感病毒能否起到有效的保护作用,本试验选择其中分离到的三大分支中具有代表性的5株病毒株作为试验毒株,选择两种H9N2亚型流感灭活疫苗通过免疫攻毒试验,对抗体和排毒量的测定来验证疫苗对病毒的保护效果。结果发现,疫苗免疫14 d已达到HI抗体的保护水平(≥4 log2),当免疫21 d时,两种疫苗的抗体水平约为(8 log2)左右,具备较强保护机体的能力,此时开始进行攻毒,通过疫苗攻毒排毒检测,结果说明现行商品疫苗对流行的H9N2亚型流感病毒不能完全保护。综上所述,野禽H9N2亚型流感病毒在发生变异,抗原性也在随之改变,我们应该尽快研发出有效的疫苗来控制其病毒的暴发流行。为了减少H9N2亚型流感的发生,我们应该密切的关注周围流感病毒的动态,经常进行该病毒的流行病学调查,做好饲养管理和疫苗的合理使用,同时加强监测和防控措施,为人间安全提供保障。