昆虫细胞系具有非常广泛而重要的科学和应用价值。本研究参考动物细胞培养中植块培养的方法，从昆虫幼虫脂肪体细胞的原代培养入手，系统研究了以昆虫脂肪体组织为实验材料建立昆虫细胞系的方法，并初步探讨了昆虫细胞在体外增殖的机制，试图为更多昆虫脂肪体细胞系的建立提供有效的技术手段。研究中选用健康的光肩星天牛(Anoplophora glabripennis)幼虫脂肪体组织为实验材料进行原代培养，通过比较不同虫龄、不同取材部位的大小和完整性、不同培养表面、不同培养液种类和pH、不同血液中酚氧化酶原抑制物的种类和添加比例、原代培养物的贴壁处理等因素对原代培养结果的影响，以及传代方式、条件、时机等对传代培养结果的影响，试图探索出一套特有的昆虫脂肪体细胞建系方法。实验结果表明，由脂肪体组织建立昆虫细胞系，最佳的取材为末龄或进入预蛹期幼虫体内完整的脂肪体组织，优先使用一次性塑料培养瓶，原代细胞培养液的最佳配制比例为：TNM-FH(80％)，胎牛血清(10％)，苯基硫脲(10％)，pH6．2～6．8。决定昆虫脂肪体细胞是否成系的关键因素包括：原代培养的组织能否同培养器皿表面紧密接触(贴壁)，紧密贴壁的组织块倾向于游离出分裂能力较强的细胞群；在新生细胞长满瓶底时，处理好第一次或前几次转瓶、传代的步骤非常重要。最佳的初次传代方式是轻轻摇晃，将较易脱壁的细胞以较高的密度传入新的培养瓶中，同时注意不要扰动原组织块，减小对细胞的剪切力。原代培养换液量也需要根据细胞的生长状况而定，一般为换液量的50％。 运用上述方法，本研究共建立了7株昆虫幼虫脂肪体细胞系(IOZCAS-Spex-Ⅱ，IOZCAS-Spex-Ⅲ，IOZCAS-Spex-Ⅳ，IOZCAS-Spex-Ⅴ，IOZCAS-Spex-Ⅵ，IOZCAS-Spex-Ⅶ，IOZCAS-Ha-Ⅰ)，其中6株来自甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)，1株来自棉铃虫(Helicoverpa aimigera)。7株细胞系的细胞均以圆形为主；新建立的细胞系IOZCAS-Spex-Ⅱ和IOZCAS-Ha-Ⅰ的第10代细胞群体倍增时间分别为108．8h和65．2h；IOZCAS-Spex-Ⅱ和IOZCAS-Ha-Ⅰ染色体符合典型的鳞翅目染色体数目较多的特点，多数细胞为多倍体。使用DAF-PCR的方法，鉴定了新建立的细胞系分别来自其同源的昆虫，而与实验室保存的其它昆虫细胞系PCR扩增谱带不同。细胞长期冻存在-80℃的环境下，并保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，且多次复苏成功。新建细胞系均对同源核型多角体病毒敏感，但敏感程度各不相同，对其它非同源种类的核型多角体病毒不敏感。对已建的细胞系IOZCAS-Spex-Ⅱ进行了单细胞克隆，当前正在进行放大培养。 使用5’-BrdU掺入法标记了光肩星天牛脂肪体细胞在体内和体外的短期增殖情况，