卒中是一种具有高发病率、高致死率和高致残率的严重危害人民健康的疾病,血流供应不足引起神经细胞死亡是缺血性卒中的主要病理。因此促进脑组织缺血区域的血管重建、恢复脑血流是重要治疗策略,而血管新生是增加脑缺血后血流量的重要途径。丁苯酞(NBP)是我国自主研发的用于临床缺血性卒中治疗的小分子药物。过往的研究表明,丁苯酞具有多靶点作用,可抑制细胞凋亡、抑制血小板、血栓形成、抗氧化损伤等。而丁苯酞在促进血管新生的作用方面,已证明可以增加血管数量以及促血管生长因子的表达量,但是其潜在的具体作用机制仍然未知。在本课题的研究中,我们结合体内和体外实验共同来探究丁苯酞促进血管新生的作用及其具体可能的作用机制。我们通过线栓法大鼠短暂性大脑中动脉阻塞模型来模拟临床的缺血性卒中,通过检测脑梗死体积、体重及神经行为学功能评分来评估丁苯酞的治疗效果。通过免疫荧光染色检测CD31阳性血管、CD31和BrdU双阳性内皮细胞数量,同步辐射脑微血管活体成像检测灌注微血管密度以及免疫蛋白印迹检测促血管生长因子表达情况来探究丁苯酞对缺血性卒中后大鼠的促血管新生作用。此外,还通过脑组织Real-time PCR、免疫蛋白印迹和免疫荧光染色以及体外培养星形胶质细胞的免疫蛋白印迹和免疫荧光染色来探究丁苯酞对声音刺猬蛋白表达的影响。本课题还通过siRNA干扰体外星形胶质细胞表达声音刺猬蛋白来探究丁苯酞处理后的促血管生长因子表达和促血管新生作用是否通过声音刺猬蛋白的调控,对丁苯酞促进血管新生作用可能的机制进行了进一步探究。实验结果表明,与植物油对照组相比,丁苯酞能够减少卒中后大鼠的脑梗死体积(p<0.01)、缓解体重下降(p<0.05)以及促进神经行为学功能的恢复(p<0.05),改善预后。丁苯酞处理后,短暂缺血性卒中后大鼠第14天的血管总数(p<0.05)、新生血管数(p<0.001)、灌注微血管数(p<0.01)和促血管生长因子的表达量(p<0.01)均比植物油对照组增加。体内及体外的实验结果均表明丁苯酞能够促进星形胶质细胞表达声音刺猬蛋白(p<0.05)。此外,siRNA下调星形胶质细胞表达声音刺猬蛋白后,丁苯酞促进HUVEC表达促血管生长因子的能力以及HUVEC的增殖、迁移和成管能力均受到明显抑制(p<0.05)。丁苯酞促进血管新生的可能机制是通过上调星形胶质细胞表达声音刺猬蛋白,进而增加促血管生长因子的表达,促进血管新生。随着对治疗机制的进一步了解,丁苯酞可能具有更好的临床应用。