【摘 要】
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甜菜M14品系是郭德栋教授利用二倍体栽培甜菜(Beta vulgaris L.)与四倍体野生白花甜菜(Beta.corollifiora Zoss.)杂交及回交获得的甜菜单体附加系。相关研究已经证实,甜菜M14品系
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甜菜M14品系是郭德栋教授利用二倍体栽培甜菜(Beta vulgaris L.)与四倍体野生白花甜菜(Beta.corollifiora Zoss.)杂交及回交获得的甜菜单体附加系。相关研究已经证实,甜菜M14品系具有野生白花甜菜抗旱、抗寒、耐盐、无融合生殖等优良性状。实验室前期利用iTRAQ LC-MS/MS技术定性和定量研究甜菜M14品系盐应答(0、200、400 mmol/L NaCl)差异表达蛋白质,发现盐胁迫下甜菜M14品系叶片中涉及胁迫和防御的的ROS清除机制中抗氧化酶系统7种主要酶的变化最为显著,其中6个蛋白质上调,1个蛋白质下调。本试验选择其中一个上调蛋白点,编码乙醇酸氧化酶(Glycolate oxidase,GO)的BvM14-GO基因进行在盐胁迫下抗氧化酶系统中功能和作用的研究。本试验利用PCR技术获得BvM14-GO基因cDNA全长并对其进行生物信息学分析得出cDNA全长共计1151bp,ORF为1113bp(包括终止密码子),编码370 aa;系统发育分析表明,与Gen Bank中已测序栽培甜菜(Beta vulgaris)中GO亲缘关系最近。利用Real-time技术对BvM14-GO基因进行组织特异性表达分析,结果显示在甜菜M14品系叶中表达量最高。构建了BvM14-GO基因的大肠杆菌表达体系,在0.5 mM IPTG、37℃3h的诱导条件下BvM14-GO蛋白表达量最高,且可测得融合蛋白酶活为27.934U/ml。构建BvM14-GO基因植物表达载体,对150 mM NaCl胁迫下转BvM14-GO基因拟南芥植株根长、鲜重、四种抗氧化物质H2O2、MDA、ASA、GSH含量进行观察及测定;对植株中GO基因进行转录水平及酶活测定,来探究盐胁迫下BvM14-GO基因功能。结果表明BvM14-GO基因能够稳定的在植株中进行表达,且转入BvM14-GO基因能够增强植物对于盐胁迫的抵御能力,减小盐胁迫对植株生长发育的抑制作用。对抗氧化酶系统中七种关键酶编码基因的转录水平及酶活进行测定,来探究盐胁迫下BvM14-GO基因在抗氧化酶系统中的作用。综合以上结果我们可以得出:(1)转BvM14-GO基因拟南芥植株抗氧化能力提高。盐胁迫下转BvM14-GO基因拟南芥过表达植株H2O2含量升高,MDA、ASA、GSH含量均有所减少,因为植株抗氧化系统中As A-GSH循环中三种关键酶MDAR、APX、DHAR3含量增加,造成MDA、ASA、GSH的过量消耗。(2)转入BvM14-GO基因能够增加抗氧化酶系统中七种主要酶的表达量及酶活,其中GO、CAT、APX、MDAR、DHAR3变化较为显著,Trx及Prx R均有所增加但相比之下稍弱。BvM14-GO基因通过催化乙醇酸产生H2O2,从而调节抗氧化酶系统中其他关键酶基因的酶活及表达量,促使植物体能够高效清除植物体内活性氧,来达到提高植株的抗氧化能力,减小盐胁迫对植株生长发育的抑制作用。
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