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研究目的：本研究旨在通过体外建立A549缺氧模型模拟体内肺癌的缺氧环境,直观观察缺氧条件下A549细胞促进人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移、伪足形成及血管形成情况,揭示了体内肺癌组织内的缺氧环境与内皮细胞迁移、伪足形成、血管形成的关系,是肺癌血管生成过程中的重要环节。实验方法：A549细胞在不同氧浓度(21%、2%、0%)条件下培养24小时后,通过倒置相差显微镜观察A549细胞形态、MTT法检测A549细胞增殖、免疫细胞化学技术检测A549细胞内HIF-1a蛋白量,并通过比较各组实验结果,来确定缺氧模型是否建立成功；随后取常氧组、缺氧组的A549细胞上清液按不同的浓度(50ul/ml、100ul/ml、150ul/ml)作用于HUVEC24小时后,对照组用培养液代替,采用细胞划痕试验方法比较各组HUVEC在不同浓度梯度下的迁移情况；然后根据细胞划痕实验结果,将各组细胞迁移的最佳上清液浓度作用于HUVEC后,采用微丝绿色荧光染色方法来观察HUVEC的伪足形成,采用体外HUVEC三维培养技术在倒置相差显微镜下观察各组HUVEC的血管形成情况,并通过计数每视野下管腔样血管结构的数量对各组实验结构进行比较。实验结果：1缺氧对A549细胞生长的影响：1)与常氧组比较,缺氧组A549细胞数目增多,贴壁生长良好,部分细胞形态不规则,可见多个伪足形成(提示：缺氧有利于A549细胞侵袭转移),而无氧组A549细胞数目明显减少,细胞体积缩小,部分细胞形态消失,核质浓缩,可见少数细胞漂浮；2)与常氧组比较,缺氧组的OD值升高(P<0.05),而无氧组的OD值明显降低(P<0.05)；3)与常氧组比较,缺氧组及无氧组细胞胞浆内均有HIF-1a蛋白表达(P<0.05),且缺氧组HIF-1a蛋白表达较无氧组增加。2缺氧对HUVEC迁移及血管形成的影响:1)用各组A549细胞上清液作用于HUVEC24H后,通过组间及组内的比较,对照组的HUVEC迁移不明显,且各浓度梯度下HUVEC迁移无明显区别,而缺氧上清液干预组及常氧上清液干预组的HUVEC有明显的迁移,并呈浓度依赖性,且前者较后者迁移明显(P<0.05)；2)与对照组比较,缺氧组上清液干预组及常氧组上清液干预组的HUVEC均可见伪足形成,且前者较后者伪足形成明显；3)采用体外HUVEC三维培养技术,在倒置相差显微镜下对每视野下管腔样血管结构进行计数发现,与对照组比较,其余两组管腔样血管结构增多(P<0.05),且缺氧A549细胞上清液干预组的管腔样血管结构明显增多。结论：1缺氧环境下A549细胞生长状态良好,增殖明显,而无氧环境则不利于A549细胞的生长；2缺氧环境下A549细胞培养上清液能促进HUVEC的迁移、伪足形成、血管形成。