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目的泛福舒(OM85-BV)是一种含8种常见呼吸道病原菌的冻干溶解物,通过调节巨噬细胞的活性和细胞因子的产生,在抗感染免疫中发挥重要作用。本研究主要探讨泛福舒对小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症因子的调节作用及相关机制研究。方法体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,(1)泛福舒分别以不同的时间点及不同的浓度梯度刺激RAW264.7细胞,用RT-PCR和ELISA分别检测IL-1β, IL-6和TNF-α mRNA和蛋白的表达；细胞免疫荧光检测(?)RAW264.7细胞表面TLR4和TLR2表达情况；用小分子siRNA干扰技术分别沉默TLR4, TLR2, MyD88和TRAM基因的表达,RT-PCR和ELISA分别检测IL-1β, IL-6, TNF-α mRNA及蛋白的表达变化；(2)泛福舒以不同时间点刺激RAW264.7细胞,Western Blot检测AKT, ERK1/2, P38的磷酸化水平；用(?)AKT, ERK1/2, P38特异性抑制剂Ly294002, U0126和SB203580分别刺激RAW264.7细胞,RT-PCR和ELISA分别检测IL-1β, IL-6, TNF-α mRNA和蛋白的表达变化；用小分子siRNA干扰技术分别沉默TLR4, TLR2, MyD88和TRAM基因的表达,Western Blot检测AKT, ERK1/2, P38的磷酸化水平变化；(3)泛福舒以不同时间点刺激RAW264.7细胞,Western Blot检测P65,IκB的磷酸化水平及细胞核和细胞质P65蛋白表达变化；用NF-κB特异性抑制剂Bay11-7082刺激RAW264.7细胞,RT-PCR和ELISA分别检测IL-1β, IL-6, TNF-α mRNA和蛋白的表达变化；siRNA干扰技术分别沉默TLR4, TLR2, MyD88和TRAM基因的表达,Western Blot检测P65及IκB磷酸化水平变化。结果(1)泛福舒上调RAW264.7巨噬细胞IL-1β, IL-6, TNF-αmRNA和蛋白的表达,并呈时间和浓度依赖的方式；分别沉默TLR4, TLR2, MyD88和TRAM基因后,泛福舒诱导的IL-1β, IL-6, TNF-α mRNA和蛋白表达下调；(2)泛福舒增强RAW264.7巨噬细胞ERK1/2磷酸化水平,但对AKT,P38磷酸化水平没有影响；U0126可以部分阻断泛福舒诱导的IL-1p, IL-6, TNF-a mRNA和蛋白的表达；分别沉默TLR4, TLR2,MyD88和TRAM基因后,泛福舒诱导的ERK1/2磷酸化水平下调；(3)泛福舒增强RAW264.7巨噬细胞P65和IκB磷酸化水平,诱导P65核转位；用Bay11-7082可以部分阻断泛福舒诱导的IL-1p, IL-6, TNF-a mRNA和蛋白的表达；分别沉默TLR4,TLR2,MyD88和TRAM基因后,泛福舒诱导的P65和IκB磷酸化水平下调。结论泛福舒通过TLR4和TLR2介导的ERK1/2/NF-κB通路上调RAW264.7巨噬细胞IL-1p, IL-6和(?)TNF-a的表达。