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背景与目的:近年来,从植物提取物中筛选具有良好抗肿瘤活性且毒副作用小的药性分子已成为当下肿瘤学研究的热门领域之一。顺式-橙花叔醇（Cis-Nerolidol,Cis-N）是一种广泛存在于多种植物、具备多样药理作用及生物学活性的倍半萜烯醇。既往研究发现,Cis-N不仅具有一定的抗炎、抗氧化、抗真菌、抗寄生虫等作用,还表现出良好的抗肿瘤活性。目前,Cis-N对肝癌细胞的作用及其机制鲜有研究。本研究拟探讨Cis-N对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在机制,以期为日后Cis-N的临床应用提供一定的理论基础。方法:1、采用MTT法检测不同浓度的Cis-N（0、50、100、150、200μM）在不同作用时间下（0、24、48、72h）对肝癌细胞株HepG2增殖活性的影响。2、采用流式细胞术（Annexin V-FITC/PI双染）检测Cis-N（100μM、24h）对HepG2细胞凋亡的影响;此外,采用Western-Blot（WB）法检测HepG2细胞经Cis-N（100μM、24h）处理后Caspase-3、Cleaved Caspase-3蛋白表达量的变化。3、采用流式细胞术（PI单染）检测Cis-N（100μM、24h）对HepG2细胞周期的影响。4、采用细胞划痕实验观察不同浓度的Cis-N（0、50、100、150、200μM,24h）对HepG2细胞迁移的影响;每间隔6h显微镜下拍照记录。5、采用Transwell侵袭实验观察不同浓度的Cis-N（0、50、100、150、200μM,24h）对HepG2细胞侵袭的影响;6、采用WB法检测不同浓度Cis-N（0、50、100、150、200μM,24h）对HepG2细胞p-Akt和Akt蛋白表达的影响。7、采用qRT-PCR法检测Cis-N（100μM,24h）对HepG2细胞中Akt各亚型（Akt1、Akt2、Akt3）mRNA表达量影响。8、应用蛋白合成抑制剂-环己酰亚胺（Cycloheximide,CHX）（50μg/ml）设计“CHX追逐实验”,WB法检测Cis-N（100μM）对HepG2细胞Akt蛋白降解速率的影响。9、分别应用蛋白酶体抑制剂-硼替佐米（10n M）、溶酶体抑制剂-氯喹（40μM）或广谱胱天蛋白酶抑制剂-Boc-D-FMK（100μM）预处理HepG2细胞1h,再加入Cis-N（100μM）继续处理HepG2细胞24h,WB法检测HepG2细胞Akt蛋白表达量变化。10、采用WB法检测不同浓度Cis-N（0、50、100、150、200μM,24h）对HepG2细胞中p62、LC3-I、LC3-II蛋白表达的影响。11、应用溶酶体抑制剂-氯喹（40μM）预处理Hpe G2细胞1h,再加入Cis-N（100μM）继续处理HepG2细胞24h,采用WB法检测HepG2细胞p-Akt和Akt蛋白的表达量变化,并采用MTT、流式细胞术、划痕、Transwell等实验观察HepG2细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的变化。结果:1、MTT实验结果显示:Cis-N可以显著抑制HepG2细胞的增殖活性,并呈现剂量及时间依赖性（均P<0.05）。经统计学分析,Cis-N处理HepG2细胞24h的IC50为103.8±1.04μM,故选用100μM、24h作为后续细胞凋亡、周期等实验的药物作用浓度及时间。2、流式细胞术（Annexin V-FITC/PI双染）结果显示:Cis-N组HepG2细胞的凋亡率明显高于对照组（DMSO）;WB法检测发现:Cis-N可下调Caspase-3蛋白水平,上调Cleaved Caspase-3蛋白水平（均P<0.05）。3、流式细胞术（PI单染）结果显示:Cis-N可将HepG2细胞周期显著阻滞于G1期（均P<0.05）。4、划痕实验结果显示:Cis-N能明显抑制HepG2细胞的迁移,并呈现剂量依赖性（均P<0.05）。5、Tanswell侵袭实验结果显示:Cis-N能明显抑制HepG2细胞的侵袭,并呈现剂量依赖性（均P<0.05）。6、WB法检测发现:Cis-N能显著减少HepG2细胞中Akt蛋白的表达及磷酸化水平,并呈现剂量依赖性（均P<0.05）;但各浓度Cis-N处理组与对照组之间p-Akt/Akt比值并无显著性差异（均P>0.05）。7、qRT-PCR检测发现:Cis-N不影响HepG2细胞Akt各亚型mRNA的表达量（均P>0.05）。8、WB法检测发现:联合应用CHX与Cis-N能加速HepG2细胞Akt蛋白的降解（均P<0.05）。9、WB法检测发现:仅联合应用氯喹与Cis-N组则能使HepG2细胞Akt蛋白表达量回升（P<0.05）。10、WB法检测发现:Cis-N能显著降低HepG2细胞中p62蛋白的表达水平、增加LC3-II蛋白表达量以及LC3-II/LC3-I蛋白比率,并呈现剂量依赖性（均P<0.05）。11、抑制自噬-溶酶体途径不仅能使Akt蛋白表达量及磷酸化水平显著回升,还可显著减弱Cis-N对HepG2细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用及凋亡诱导作用（均P<0.05）。结论:1、Cis-N能显著抑制HepG2细胞体外增殖活性;其可将HepG2细胞周期显著阻滞于G1期,并诱导HepG2细胞凋亡。2、Cis-N能显著抑制HepG2细胞体外迁移及侵袭能力。3、Cis-N能显著下调HepG2细胞Akt蛋白的表达量及磷酸化水平。4、Cis-N能显著激活HepG2细胞自噬活性,诱导自噬依赖的Akt蛋白降解,阻断Akt信号通路的转导,从而发挥抑癌作用。