二倍体野生马铃薯S.verrucosum花药培养与再生植株鉴定

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马铃薯栽培种(Solanum tuberosum L.)高度杂合,且呈四倍体遗传,使得该作物科研和育种进展缓慢。本研究以自交亲和、杂合的二倍体马铃薯S.verrucosum(PI 275256)为供体材料,研究了花苞大小与小孢子发育时期的对应关系,不同培养基激素配比对再生植株诱导率的影响。通过花药培养获得了23份再生植株,并对上述再生植株进行倍性鉴定和纯合分析。主要结果如下:1、确定了单核靠边期对应的花苞大小。单核靠边期是花药培养最合适诱导的时期,当PI 275256子代的花苞长度约6.0 mm,花药长度约4.0 mm,以浅绿色为主时,为该材料的单核靠边期。2、建立了高效稳定的花药培养体系。以MS培养基为基础,添加不同浓度的NAA、6-BA、KT,共设计了11种诱导培养基。研究发现2 mg/L NAA+1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+MS诱导培养基诱导率最高,响应率为11.88%。通过花药培养共获得了23份再生植株。3、明确了再生植株的倍性。经保卫细胞叶绿体计数法和流式细胞术倍性鉴定,23株再生材料有单倍体17株、二倍体6株。4、初步鉴定了再生植株的纯合度。利用位于不同染色体的5对SSR标记对所有再生植株进行了纯合度分析。所有一倍体在5对SSR位点均为纯合;6株二倍体在上述位点是纯合基因型,推测这些二倍体为纯合(来源于花药培养过程中小孢子自发加倍)的概率为96.875%。
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