【摘 要】
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目的研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后,星形胶质纤维酸蛋白(GFAP)与高迁移率族蛋白(HMGB1)在海马CA1区表达变化,探讨GFAP与HMGB1二者之间是否相关。方法1、实验动物:体重250~310
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目的研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后,星形胶质纤维酸蛋白(GFAP)与高迁移率族蛋白(HMGB1)在海马CA1区表达变化,探讨GFAP与HMGB1二者之间是否相关。方法1、实验动物:体重250~310g普通级成年雄性SD大鼠60只(安徽医科大学实验动物中心提供)。2、实验动物分组:60只雄性SD大鼠随机分为假手术组及缺血组,两组再分为1 d,3 d,7 d,14 d,28 d ,5个亚组,每个亚组6只大鼠。3、动物模型的制备:参照Longa[1]线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞再灌注(MCAO/R)模型。采用大脑中动脉栓塞2h制备SD大鼠脑缺血模型;假手术组不插入线栓,余手术过程同缺血组。4、苏木素-伊红染色: HE染色观察海马CA1区的病理变化。5、免疫组化:用免疫组化法观察在海马CA1区域GFAP和HMGB1在脑缺血1 d,3 d,7 d,14 d,28 d后表达情况。6、免疫荧光双标:用免疫荧光双标结合激光共聚焦分析脑缺血后在海马CA1区域GFAP和HMGB1时程表达变化。7、统计学分析:应用spss13.0统计软件进行数据处理,两组均数间比较采用t检验,多组均数比较采用单因素方差分析。以α=0.05作为检验标准,实验数据用均数±标准差( x±s)表示。结果1.对照组大部分细胞形态正常未发现明显病理变化,缺血再灌注组随着时间变化可见胶质细胞增生、肥大,间质水肿,细胞水肿,神经元细胞坏死、核萎缩,在阻塞区域,炎性细胞明显增加。2.与假手术组比较,脑缺血组各时间点脑组织GFAP、HMGB1表达均显著增加(P<0.05)。3.脑缺血组中再灌注7 d时GFAP表达最多,再灌注14 d时HMGB1表达最多(P<0.05)。4.脑缺血组大鼠脑组织GFAP与HMGB1表达成正相关且在海马CA1区存有共定位细胞(r1=0.499, P<0.05; r2= 0.586 ,P<0.05)。结论脑缺血后,大鼠海马CA1区HMGB1表达主要与星形胶质细胞激活有关,过度激活的星形胶质细胞和过量表达的HMGB1促进脑缺血后神经元的迟发性损伤。
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