质谱及拉曼光谱法在蛋白磷酸化分析及真菌鉴定中的应用研究

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随着科学的发展,质谱及拉曼光谱分析方法在生物医学领域的研究中发挥了越来越重要的作用。这两种仪器分析方法均具有灵敏度高、分析速度快、自动化程度高的优势,既可用于物质成分的定性和定量测定,也可用于物质状态和结构的表征解析。本文分别利用这两种分析测试方法,开展了两个方面的研究,主要研究内容和结论如下:(1)在禁食对小鼠下丘脑磷酸化蛋白质组影响的研究中,通过禁食的方法对小鼠进行干预,富集下丘脑组织磷酸化肽段,基于蛋白质组学技术,运用质谱法对磷酸化蛋白进行了鉴定。通过Max Quant软件蛋白搜库和建立数学统计方法,在小鼠下丘脑蛋白质中鉴定到了820个磷酸化蛋白质,对应的磷酸化位点总数为5545个,鉴定出其中组间磷酸化修饰差异显著的蛋白质681个,可能影响蛋白结合、激酶行为、转运、轴突生成等分子活动和生物学过程,并影响MAPK通路、细胞内噬等信号通路。(2)在检测和鉴别侵袭性真菌的研究中,利用拉曼光谱法对常见的3种侵袭性真菌(白色念珠菌、隐球菌、烟曲霉)进行了检测和鉴别,利用在菌体表面原位还原生成纳米银粒子,结合在干燥样品上合成银胶的方法提高了表面增强拉曼检测信号的稳定性。基于3种真菌的拉曼光谱结果,探索了多种数学统计方法,最终证明正交偏最小二乘判别分析法(OPLS-DA)对3种真菌样本均聚类明显,分类显著,置信区间基本全部处于95%内,实现了应用拉曼光谱法对3种真菌的鉴别。
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