甾体药物广泛应用于医药领域,已经成为仅次于抗生素的第二大类药物,大量的需求推进了它的发展。高效、环保、安全、节能的微生物转化法制备工艺逐渐成为甾体药物的研究热点。由于甾体药物半合成原料薯蓣皂素的短缺,使得植物甾醇作为新的原料资源进入甾体工业。9α-OH-雄甾-4-烯-3,17-二酮(简称:9α-OH-AD)是甾体药物工业化生产中的关键中间产物,在甾体药物工业化生产中起着重要作用。采用微生物发酵降解植物甾醇侧链生产9α-OH-AD,可实现甾体激素药物半合成原料多元化,但是国内在此方面的研究尚处于起步阶段。本文主要研究采用DG菌种转化植物甾醇制备9α-OH-AD,包括菌种的分离纯化以及诱变、分析方法的研究、种子培养基和发酵培养基的筛选以及优化和发酵工艺条件的优化。首先确定了 HPLC检测条件,C18烷基硅烷键合反相柱;流动相为甲醇:水=7:3(v/v);流速0.8mL/min;色谱柱温25℃;紫外检测器波长242nm。经过多次分离纯化及诱变DG菌种,得到较好的菌种DG-3-14,并且筛选优化得到适宜菌体生长转化的种子培养基和发酵培基。种子培养基为(g/L):葡萄糖3、硝酸按3、七水合硫酸镁0.5、磷酸氢二钾1、酵母浸粉15,pH值7.0左右。发酵培养基为(g/L):糖蜜4、干酵母粉20、硝酸钠1.5、七水合硫酸镁0.75、氯化钾2.75、磷酸氢二钾1.3、七水合硫酸亚铁0.5、七水合硫酸锌0.05、五水硫酸铜0.01。在发酵工艺条件方面,研究了菌种生长时间、温度、pH值、接种量、装液量、转速、底物浓度发酵时间以及添加物对转化的影响。优化结果为菌种最适生长时间是36h、发酵温度32℃、pH值6.0、接种量15%、装液量70ml、摇床转速220r/min、底物浓度1%、发酵5d,添加大豆油,可以明显提高产率。通过DG菌种的筛选、培养基和发酵工艺的优化,9α-OH-AD的产率可达到75.12%。采用DG菌种转化植物甾醇制备9α-OH-AD为甾体药物研究提供了重要参考。