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番茄是我国重要的经济蔬菜之一，番茄上病害很多，达40余种，其中包括3种重要的细菌性病菌，即，番茄细菌性斑点病菌（Pseudomonas syringaepv.tomato）、番茄细菌性溃疡病菌（Clavibacter michiganensis subsp.michiganensis）和番茄青枯病菌（Ralstonia solanacearum），其中Cmm和Pst是欧洲和地中海植物保护组织（EPPO）检疫性有害生物（EPPO/CABI，1997），也是我国检疫性细菌，在我国局部发生，对当地的番茄种植产生很大的影响，造成了严重的经济损失。近年来，随着国外优良番茄种子的引进，番茄细菌病害传入我国的风险加大，口岸针对番茄细菌病原的检疫力度和难度加大，很需要提供针对进境种子等繁殖材料的多病原高通量检测技术。本研究选取Cmm、Pst和Rs13种重要番茄病原细菌为研究对象，根据Dreier等、Fanelli等和Lee等分别获得的Cmm，Pst和Rs1的一段特异性片段设计锁式探针的T1和T2臂，再根据锁式探针的设计原则，设计通用引物、杂交探针和TaqMAN荧光探针。实验时，分别进行了3种病原细菌的超分支滚环扩增检测研究，基于锁式探针的反向斑点杂交检测技术研究，基于锁式探针的实时荧光PCR检测技术研究和基于锁式探针的DNA芯片检测技术研究，并在这些研究的基础上，运用这些检测技术对福建口岸截获的番茄种子进行高通量检测。1、建立了Cmm、Pst和Rs1三种细菌的超分支滚环扩增检测技术，并对其特异性和灵敏度进行了测试。结果显示：（1）超分支滚环扩增体系优化时，当使用Taq DNA连接酶，采用热循环连接法，可以得到很好的扩增效果；锁式探针终浓度为8pmol/L时，连接效果最好；超分支滚环扩增温度为62℃，扩增效果最佳；采用10U的核酸外切酶Ⅰ和5U核酸外切酶Ⅲ来消化未连接的线性探针，能有效消除线性探针的影响。（2）三种细菌的超分支滚环扩增的特异性很强，在供试的菌种中，只有靶标细菌能被特异性的检测到，其他的菌株检测为阴性，实验中，用常规PCR的特异性引物进性验证，与超分支滚环扩增的特异性基本一致。（3）三种细菌的超分支滚环扩增的灵敏度高，最低检测DNA浓度为500fg/μL，高于常规PCR的检测灵敏度，比常规PCR灵敏度高出1个数量级。2、建立了三种细菌的基于锁式探针技术的反向斑点杂交高通检测技术，实现了同一反应体系内同步高通量检测。结果显示：（1）在供试的菌株中，该技术能在同一反应体系内一次性检测多种病原物。（2）基于锁式探针技术的反向斑点杂交特异性强，实验中，用基于锁式探针的连接酶依赖性PCR扩增，代替滚环扩增进行反向斑点杂交，在供试的菌种中，只有靶标细菌能被特异性的检测到，其他的菌株检测为阴性。（3）基于锁式探针技术的反向斑点杂交灵敏度高，最低检测DNA浓度为5pg/μL，与常规PCR检测灵敏度相当。3、建立基于锁式探针技术的实时荧光PCR方法。结果显示：（1）该方法能从供试的菌株中分别检测出番茄上三种病原物；（2）基于锁式探针技术的实时荧光PCR技术特异性强，在供试的菌种中，只有靶标细菌能被特异性的检测到，其他的菌株检测为阴性；（3）基于锁式探针技术的实时荧光PCR方法灵敏度高，最低检测DNA浓度为50fg/μL，比常规PCR检测灵敏度高出两个数量级。4、建立基于锁式探针技术的DNA芯片检测方法。结果显示：（1）该方法能从供试的10菌株中分别检测出番茄上三种病原物；（2）基于锁式探针技术的DNA芯片检测方法特异性强，在供试的菌种中，只有靶标细菌能被特异性的检测到，其他的菌株检测均为为阴性；（3）基于锁式探针技术的DNA芯片检测方法灵敏度高，最低检测DNA浓度为500fg/μL，比常规PCR检测灵敏度高出1个数量级；（4）混合锁式探针与混合DNA的DNA芯片检测，能特异地检出靶标菌，适合口岸番茄种子的多病原高通量检测。5、用这些检测技术对番茄种子进行应用检测，对模拟的带菌番茄种子进行超分支滚环扩增，并对口岸对收集到的45份样品分别用基于锁式探针的实时荧光PCR技术、反向斑点杂交技术和DNA芯片技术分别进行检测。结果显示：（1）用Cmm使健康番茄种子模拟带菌，通过超分支滚环扩增的方法，可以检测出模拟菌Cmm，由此可推知，带菌番茄种子是可以被检测出的，该模拟方法具有实际意义；（2）用基于锁式探针技术的实时荧光PCR技术对供试的45份样品进行Cmm检测，有5份样品为阳性，其它的样品为阴性；（3）基于锁式探针技术的反向斑点杂交检测45份样品，共检测出Cmm阳性样品5份，Pst阳性样品5份，Rs1阳性样品8份，其它的样品结果均为阴性；（4）基于锁式探针技术的DNA芯片检测45份样品，共检测出Cmm阳性样品5份，Pst阳性样品5份，Rs1阳性样品8份，其它的样品结果均为阴性；（5）基于锁式探针的实时荧光PCR技术、反向斑点杂交技术和DNA芯片技术均能检测样品，且检测的结果基本一致，互相验证了方法的可靠性。