论文部分内容阅读
猪流行性腹泻病毒(PEDV)是世界范围内致猪只腹泻的主要病原体之一,尤其近十年G2型PEDV造成了养猪行业巨大的经济损失。各个年龄阶段中PEDV均有很高的感染率,能够引起腹泻、脱水等症状。目前对PEDV防控最主要的方式是疫苗免疫,免疫形式包括主动免疫和被动免疫。PEDV能够引起7日龄以下的仔猪高发病率以及高死亡率,对幼龄仔猪龄PEDV的防控方式主要为被动免疫疫苗。因此,本研究以妊娠母猪及其所产新生仔猪为研究对象,初步评价G2型PEDV灭活疫苗的被动免疫。灭活疫苗免疫后通常引起机体产生特异性的抗体,为探究免疫保护效果是否与血清中IgA、IgG抗体水平变化具有相关性,本研究首先建立了检测PEDV特异性IgA和IgG抗体的间接ELISA方法。以真核表达并纯化的PEDV S1蛋白作为包被抗原,以羊抗猪IgA-HRP、IgG-HRP分别为二抗,优化反应条件并进行特异性、敏感性以及重复性试验。特异性试验结果显示该方法对TGEV、PoRV、PDCoV和PCV2常见致猪腹泻病毒的阳性血清均无交叉反应;敏感性试验显示该方法分别能检测出400倍稀释的IgA阳性血清以及800倍稀释的IgG阳性血清;批内和批间重复性变异系数均小于15%。利用IgA和IgG抗体间接ELISA方法与间接免疫荧光(IFA)对临床样品检测,结果显示IgA、IgG抗体间接ELISA方法和IFA的总符合率分别为98.6%和96.5%。为了评估G2型PEDV的被动免疫,本研究选用DMEM和PEDV灭活疫苗分别经后海穴对妊娠母猪A、B组进行了产前40 d和产前20 d的两次免疫。产后使初生仔猪采食初乳,将5日龄仔猪随机分为3组:攻毒组、对照组以及抗体水平监测组。攻毒组和对照组分别口服PEDV LNct2a毒株F13和DMEM。临床症状显示产于未免疫母猪的仔猪在感染病毒24 h后可见精神沉郁、腹泻症状,攻毒5 d内发病率为100%,腹腔剖检结果可见肠壁组织变薄,充满淡黄色稀液和食物残渣。同时,该组仔猪排毒量高,肠组织均能检测到病毒RNA,免疫组化能观测到PEDV对回肠和空肠肠上皮细胞的感染。与之相反,产于免疫母猪的仔猪感染PEDV 5 d后只有10.5%的仔猪出现了轻微的腹泻症状,仔猪获得了高达89.5%的保护。B组仔猪几乎没有排毒现象,肠组织内病毒RNA含量极低。间接ELISA结果显示猪血清中IgA和IgG抗体水平与其中和抗体水平有极显著相关性,PEDV灭活疫苗后海穴免疫能够引起较高水平的抗体反应,并且对仔猪形成了免疫保护。综上,本研究初步证明了后海穴免疫PEDV灭活疫苗使母猪产生的高水平IgA、IgG和中和抗体为5日龄仔猪提供了被动保护,为进一步研究PEDV免疫保护机制提供理论基础。