布鲁氏菌病(Brucellosis,简称布病)是一种由布鲁氏菌(Brucella.spp,简称布氏菌)引起的人畜共患传染病,主要传染源是牛、羊、猪等家畜,其中羊种菌最易感染人。诊断和预防是目前控制该病的有效手段,但可以独立用于布病的诊断方法不足以完善,间接酶联免疫吸附试验(iELISA)操作简单、实验条件要求低、适合广泛推广。随着布病的广泛流行,全国绝大部分省市地区均相继分离到了布氏菌,而按照布病手册进行鉴定时需要有标准菌株做对照,但又存在致病性高、购买和运输难度大等问题,这对工作人员存在很大的风险。布病主要集中爆发在农区和牧区这些地区,对其进行现场调查将会对布病的流行及发展趋势有进一步的了解。为此本研究从诊断方法、生物安全和现场调查三个方面对布病展开了系统的研究。研究—为了完善布病诊断方法,构建了重组质粒pET-30a-omp19,原核表达并纯化了布氏菌Omp19,通过Western-blot验证其抗原性,以该蛋白作为包被抗原,建立检测羊种布氏菌的iELISA,对其重复性和敏感性进行了评价,通过对180份临床羊血清样本进行了检测,并与我国布病诊断标准试管凝集试验(SAT)进行了比较,利用SPSS软件对其数据进行分析。结果显示,iELISA与SAT相比,阳性符合率为96.81%,阴性符合率为77.91%,Kappa值为0.7531,两种方法中高度一致,诊断总符合率达到87.78%,可以作为一种有效的羊种布氏菌血清学诊断的备用方法。研究二为寻找牛羊猪种布氏菌生物Ⅰ型标准参考菌株544A、16M、1330S和相应疫苗菌株S19、M5、S2的相同与差异点,探索将3株疫苗菌株用于鉴定时作为对照菌株的可能性。采用生化分型鉴定、16SrDNA序列分析、BCSP31-PCR、AMOS-PCR、多重聚合酶链式反应、多位点可变数目串联重复序列(MLVA)、多位点序列分型(MLST)及脉冲场凝胶电泳(PFGE)等多种方法对3对标准参考菌株和疫苗菌株进行比较。结果发现544A与S19、1330S与S2相似性很高,16M与M5存在差异。各种生化鉴定方法、16SrDNA序列分析、BCSP31-PCR、AMOS-PCR试验中,可用牛羊猪种布氏菌生物Ⅰ型疫苗菌株替代标准参考菌株；多重PCR和PFGE中试验中可用S2和S19替代1330S和544A；MLST中,可用S2替代1330S。MLVA可区分三对疫苗菌株和标准参考菌株。可说明S19和S2可作为参考菌株代替544A和1330S,M5与16M在部分实验中可以替代。但在毒力实验中不能替代。研究三为了解内蒙古自治区的布病疫情,选择四子王旗开展了人间布病疫情的横断面调查,主要针对当地的布病患病率,家庭布病相关知识、态度和行为及对布病的认知等情况,以四子王旗的农区和牧区两个区域为研究对象,各区随机抽取5个村,每村抽取30户,进行家庭问卷调查并进行单因素x2检验,采集血清样本进行实验室检查。结果在300户家庭的调查中发现阳性患病率为16.67%,牧区发病率为11.70%,农区为7.90%,当地村民对布病相关知识认知率较低,感染布病危险因素增加。需加大知识普及,注重个人防护。