1型鸭病毒性肝炎(Duck Virus Hepatitis,DVH)是幼龄雏鸭的一种高度致死性、急性传染病。该病以发病急速、传播快速、死亡率高为主要特征,以肝炎和出血为主要病理变化,临诊表现角弓反张。VP1蛋白含有多个与细胞结合的表位,能诱导机体产生免疫反应和中和抗体,是鸭肝炎病毒主要的毒力决定因素。鸭病毒性肠炎(Duck Viral Enteritis, DVE),又名鸭瘟(Duck Plague, DP),是鸭、鹅及多种雁形目禽类的一种急性、热性、败血性传染病。本研究以鸭肠炎病毒(DEV)为载体,构建表达1型鸭肝炎病毒(DHV-1)VP1蛋白的重组鸭肠炎病毒,为鸭肝炎病毒的基因工程疫苗的研究奠定物质基础。通过RT-PCR扩增DHV-1VP1基因,测序正确后将其克隆至pcDNA3.1(+)载体,然后扩增含有pCMV、VP1和BHG pA的表达盒；同时以质粒pEASY-Blunt Simple-EGFP和pMD18-T-GPT为模板,PCR扩增EGFP表达盒和GPT表达盒;以DEV DNA为模板,PCR扩增US4左右臂基因。然后依次将EGFP表达盒、VP1表达盒、同源臂基因和GPT表达盒克隆至pMD18-T载体,构建重组病毒转移载体pMD18-T-VP1-GPT-EGFP。将重组病毒转移载体与DEV DNA共转染次代鸭胚成纤维细胞,经过同源重组和加压筛选纯化,获得纯病毒,经PCR、RT-PCR、Western blot及IFA鉴定后命名为重组病毒DEV/ΔgG/VP1电镜观察DEV和DEV/ΔgG/VP1病毒粒子,结果表明DEV和DEV/ΔgG/VP1具有相同的形态结构；并且DEV/ΔgG/VP1病毒粒子能够与兔抗DHV-1VP1多克隆抗体形成免疫复合物,表明DEV/ΔgG/VP1能够表达VP1蛋白,并且VP1蛋白表达在病毒粒子表面。将100TCID50DEV和DEV/ΔgG/VP1分别接种于原代鸭胚成纤维细胞,在不同时间收集病毒,测定病毒效价,绘制病毒生长曲线,结果表明DEV在72h左右病毒效价达到高峰,高于DEV/ΔgG/VP1效价,DEV/ΔgG/VP1在96h左右效价达到高峰,说明US4基因的缺失和外源基因的插入并没有影响病毒的增殖,但其增殖时间相对滞后。分别接种100TCID50亲本病毒与重组病毒,测定其在低熔点琼脂糖中形成的噬斑大小直径,结果表明两者形成的噬斑大小直径无显著差异,表明US4基因的缺失和外源基因的插入并没有影响病毒在鸭胚成纤维细胞中的传播。提取第10、15、20代重组病毒DEV/ΔgG/VP1DNA扩增VP1基因皆得到阳性结果,间接免疫荧光能够检测到第20代重组病毒VP1蛋白,证明VP1基因在重组病毒中稳定存在。