本研究拟采用2-D DIGE联合基质辅助激光解吸离子化．串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)技术，对肝内转移和未转移肝癌患者以及正常人血清进行蛋白质组学研究，筛选出转移和未转移肝癌患者血清中表达差异与转移相关的蛋白质，并对差异蛋白进行初步验证和功能解析，不仅有助于从分子水平阐述肝癌转移的发生发展机制，也可以为早期诊断肝癌转移提供有效的预警牛物标志物，并且有望为肝癌转移的防治提供潜在的药物靶点。 目的: 1.建立和优化肝癌患者血清双向荧光差异凝胶电泳体系(2-D DIGE)的技术平台，为筛检肝癌患者血清转移相关蛋白奠定基础。 2.运用优化后蛋白质组学技术，建立肝癌转移的血清蛋白质指纹图谱(PMF)。 3.筛选和鉴定肝癌患者血清中转移相关表达差异的蛋白质，探讨这些差异蛋白在肝癌转移发生发展中的作用，补充肝癌转移发生发展的分子机制。 4.对新发现有意义的转移相关的差异蛋白进行初步再验证，证实2-D DIGE分析和质谱鉴定的真实性、可靠性。 方法: 1.收集36例肝癌患者(肝内转移18例和未转移18例)和12例正常人血清样本。血清样品经不同浓度的乙腈部分变性，联合去除高丰度蛋白进行不同的方式预处理。 2.血清样品经过不同预处理后，分别进行不同的CyDye染料交叉标记，然后依次进行2-D DIGE、图像扫描，并用专用分析软件DeCyder v6.0，比较各组样本问蛋白点图像差异和斑点检出率，并评估该技术体系。 3.随机抽取12例肝内转移和12例未转移肝癌患者及12例正常成人血清样品，经过确定优化的预处理方式后，用不同的CyDye染料交叉标记，依次进行2一D DIGE以分离蛋白质、图像分析以寻找表达差异的蛋白点，对表达差异的蛋白点进行MALDI-TOF/TOF-MS分析，获得PMF，检索MASCOT数据库鉴定蛋白。 4.用经典的分子牛物学技术Western Blot，对有意义的差异蛋白进行再验证。 结论: 1.成功建立并优化了血清蛋白质组学技术体系，证实了该技术平台是筛选疾病相关血清标志物的有力工具。 2.建立了肝癌转移相关的血清蛋白质指纹图谱(PMF)，成功鉴定出30个差异性蛋白质，共22种肝癌转移相关血清蛋白质，可能参与了肝癌转移的过程。 3.初步确定并验证了CK9、CK10和C4A三个差异蛋白质与肝癌转移密切相关，可作为肝癌转移相关潜在的血清标志物，值得进一步研究。 本课题的特色和创新点： 1.运用高通量、高效率的比较蛋白质组学的技术手段，优化了血清样本的预处理，首次从肝内转移和未转移肝癌患者以及正常人血清中筛选并鉴定出22种差异蛋白。 2.部分差异蛋白在肝癌的转移中为首次报道，并且首次验证差异蛋白CK9,CK10,C4A在肝内转移患者血清中的变化，可能在肝癌的侵袭和转移中发挥作用。 本课题的潜在应用价值： 1.筛检出的部分差异蛋白可能成为肝癌转移复发的诊断的生物标志物和预警判断指标，以丰富肝癌诊疗指标的选择和组合，并有助于制定和完善肝癌肝移植的适应证。 2.通过对差异蛋白CK9,CK 10,C4A的验证和功能解析，为肝癌转移复发的预测及相关研究奠定了理论基础，并有助于进一步补充和完善肝癌转移的分子机制。 3.一些新发现的转移相关蛋白还可能成为潜在的治疗新靶点，通过蛋白质组学研究与临床应用相结合，筛选特异性抗原，有望制作瘤苗或单克隆抗体应用于临床。